非瘟病毒传播规律解析及其检测技术

三、非洲猪瘟抗原/抗体诊断技术

非洲猪瘟实验室诊断技术分为病原学（抗原）和血清学（抗体）两种。病原学检测有病毒分离－血细胞吸附试验、直接免疫荧光法、普通PCR、荧光定量PCR和双抗体夹心ELISA等方法。血清学检测有间接ELISA（测定非洲猪瘟特异性抗体）、阻断ELISA（检测非洲猪瘟特异性抗体）、免疫印迹和间接免疫荧光等方法。

（一）非洲猪瘟病毒抗原诊断技术—实时荧光定量PCR方法

实时荧光定量PCR（Real-time Q-PCR）技术，是指在PCR反应体系中加入荧光基团，利用荧光信号累积，实时监测整个PCR过程，最后通过标准曲线对反应体系中未知模板进行定量分析的方法。PCR检测的是样本里最初始的核酸数，起始样本中阳性核酸数量越多，CT值越小。

1.定量PCR与常规PCR的差别。定量PCR技术是通过PCR扩增反应中每一个循环产物荧光信号的实时检测从而实现对起始模板定量及定性的分析。常规PCR技术是对PCR扩增反应的终产物进行定量及定性分析。

2.实时荧光定量PCR中的三个概念。扩增曲线：是荧光强度与循环数的对应关系。横坐标表示扩增循环数（Cycle），纵坐标表示荧光强度，每个循环进行一次荧光信号的收集。荧光阈值：PCR扩增信号进入相对稳定对数增长期时的荧光值。Ct值：每个反应管内的荧光信号达到设定的阈值时所经历的循环数。

（二）血清学诊断

非洲猪瘟在感染早期即可检测出抗体，抗体阳性即代表感染。正确的非洲猪瘟诊断必须平行使用多种方法，如间接ELISA、竞争ELISA和夹心ELISA等。

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