非洲猪瘟病毒抗体间接ELISA检测方法的建立与应用

1.9 重复性试验

用同一批次纯化的重组ASFV P30蛋白包被酶标板，对4份猪血清样品进行ELISA检测，每份样品重复4孔，考察该方法的批内重复性；另以5个批次纯化的重组ASFV P30蛋白包被酶标板，分别对ASFV强阳性、阳性、阴性血清进行ELISA检测，考察该方法的批间重复性。

1.10 已知样本检测比较

分别用重组ASFV P30蛋白iELISA与重组ASFV P30-2His6蛋白iELISA两种检测方法，对已经检测确认的阳性和阴性血清进行检测，评估这两种方法与临床样本的吻合度。试验数据用Excel自带程序统计。

2 结果

2.1 ASFV P30蛋白编码基因扩增

以pET-28a-ASFV P30-2His6为模板，用前述引物进行PCR扩增，结果如图1所示。平行的2个阳性扩增产物（a、b）大小均为500~750 bp，与设计的扩增基因大小吻合。

2.2 重组ASFV P30蛋白表达

将诱导表达后的重组ASFV P30蛋白进行SDS-PAGE检测。由电泳结果（图2）可见，去掉组氨酸标签的重组ASFV P30蛋白相对分子质量略小于35 ku，而表达蛋白的全菌液和全菌液离心后的上清液蛋白量相当，表明该蛋白的原核表达为可溶性表达。

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