我国田间发现低致死率非洲猪瘟基因 II 型自然变异流行株

      为了评估 ASFV 对猪的致病性，将 16 头 无特定病原体（SPF）猪随机分为 4 组，分别以102和103 HAD50 剂量接种 HuB/628/20（A）和 HLJ/44/20（B）毒株；将 16 头 SPF 猪平均分为 4 组，分别以103和106 TCID50剂量接种 HLJ/HRB1/20（C）和 HeB/Q3/20（D）分离株。从接种之日起，将两头 SPF 猪与106 TCID50剂量接种猪同居饲养。每天记录猪的发病和存活情况。

  结果发现，HLJ/HRB1/20 分离株106TCID50 接种组有2头猪在接种后的第 10 天出现持续体温升高现象（>40.5℃），第13天共有 3 头猪出现体温升高，另 一头猪在接种后第 22 天出现持续体温升高。103TCID50 接种猪 1 头在接种后第 17 天出现持续体温升高，另一头猪在接种后第 9-12 天持续 4 天高温（表2）。106TCID50 接种4头猪有3头分别在接种后第16 天、23天和24天死亡，有1头猪存活；106TCID50 接种的 4 头猪全部存活（图4）。106TCID50 接种猪普遍出现关 节肿大、腹部和胸部皮肤肿块凸起，腹部脐带处出现皮肤溃烂等亚临床症状（图5）。103TCID50 接种猪也出现了明显的关节肿大现象。对采集的口拭子及肛拭子 进行qPCR病毒核酸检测发现，106TCID50接种猪自接种后第4天开始口腔排毒， 其存活猪排毒一直持续到接种后第 22 天；第10天开始肛门排毒，其存活猪排毒 持续到接种后第 24 天（图6）。103TCID50接种猪在接种后第8天开始出现口腔 排毒，在接种第 24 天后仍有个别猪高水平口腔排毒；在接种后第10天开始肛门 排毒（图6）。接种后不同时间采集抗凝血进行 qPCR 核酸检测，106TCID50接种 猪有 2 头在接种第3天血液中即可检测到低水平病毒核酸拷贝，第 5 天起 4 头猪 血液中全部检测到病毒（图6）。103TCID50接种猪血样检到病毒起始时间较高剂 量组滞后2天，且血液中病毒含量低于高剂量组（图6）。

  图5. HLJ/HRB1/20 接种猪的临床症状和组织损伤情况

接种猪表现出关节肿胀（A）、 瘫痪（B）、皮肤肿块（C）和皮肤坏死（D）等临床症状。剖检可见组织损伤变化包括绒毛 心（E）、腹腔积液（F）、关节炎（G）、扁桃体损伤（H）和淋巴结（上颌下淋巴结（I）、腹 股沟淋巴结（J）和纵隔淋巴结（K））充血。
  HeB/Q3/20分离株106TCID50接种组有2头猪第8天出现持续体温升高现象， 第 9 天 4 头猪全部体温升高，表现出与 HLJ/HRB1/20 高剂量攻毒组相似的临床 症状（表2）；第14天有2 头接种猪发病死亡。103TCID50接种组有2 头猪第8天出现持续体温升高。103TCID50攻毒组的4头猪28天观察期内均存活（图 4）；除皮肤坏死外，所有存活猪均表现出与 HLJ/HRB1/20 低剂量攻毒组的猪相似的 病程和临床特征（表2）。2018 年分离的我国第一株非洲猪瘟流行株 HLJ/18，在接种后第 3 天所有猪 就出现体温持续升高，第4天口拭子排毒，第5天肛拭子排毒，10天之内接种 猪全部死亡（Zhao D et al, EMI, 2019）。相比之下，两株 CD2v 功能失活自然变 异株 HLJ/HRB1/20 和 HeB/Q3/20 对 SPF 猪致病力均显著降低。

  图 6. HLJ/HRB1/20 接种猪和同居猪采集样品中的病毒载量

     在接种后不同时间点采集接种猪和同居猪的口腔拭子、肛拭子及血液样本，通过 qPCR 检测样品中的病毒 p72 基因拷贝数。黑色虚线表示检测下限，1000拷贝/毫升。星号表示由于猪死亡，在指定的时间点无样品。

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