我国田间发现低致死率非洲猪瘟基因 II 型自然变异流行株

（A）将 HuB/628/20，HLJ/44/20，HeB/Q3/20 和 HLJ/HRB1/20 以 MOI 为 0.1 感染 PAM，接种 24 小时后固定细胞，使用间接免疫荧光（IFA） 进行分析；以 MOI 为 0.2 感染 PAM，进行 HAD 测定；通过电子显微镜（EM）进行分离株 形态观察。（B）分离株在 PAM 上生长特征。以 MOI 为 0.1 的病毒剂量感染 PAM，不同时 间点收集细胞上清，利用 qPCR 测定上清液中病毒 p72 基因拷贝数。

  4、HAD 表型阳性的分离株接种猪急性发病、高度致死对HAD表型阳性的两株病毒HuB/628/20和HLJ/44/20，进行动物回归试验， 评估其对家猪的致病力。分别以102和103 HAD50 两个剂量肌肉注射接种猪，每剂量4头，每天观察接种猪临床症状和死亡情况。HuB/628/20 感染猪第 3 天起 开始出现发病症状，包括发热、精神沉郁、皮肤发绀或呼吸窘迫；感染后后第 5-8 天全部发病死亡。HLJ/44/20 感染猪第 3 天起出现症状；在接种后第 5-6 天全 部死亡（表2和图4）。结果表明，HuB/628/20 和 HLJ/44/20 对家猪的致病力与 HLJ/18 相当，对家猪都表现高度致死。

  5、缺失 HAD 表型（non-HAD）分离株毒力降低，接种猪引起持续感染、慢性 病程和部分死亡已有研究证明 CD2v 是影响非洲猪瘟病毒毒力的重要功能基因之一。人工缺 失 CD2v 编码基因可降低 BA71 株（基因型 I）和 HLJ/18 株（基因型 II）对家猪 致病力，但 CD2v 编码基因缺失不影响 Malawi Lil-20/1 和 Georgia 2010 分离株的 致病力。为了明确 CD2v 编码失活对我国田间毒株致病力的影响，我们选取2株 non-HAD 病毒进行动物回归试验。其中一株为 CD2v 编码区发生25个核苷酸缺 失的黑龙江分离株 HLJ/HRB1/20，另一株为 CD2v 基因 301 位突变的河北分离株 HeB/Q3/20。用106TCID50 和103 TCID50 两个剂量分别接种 SPF 猪，每剂量接种4 头，持续观测 28 天。

  图 4. 2020 年 ASFV 分离株对猪致死性分析

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