我国田间发现低致死率非洲猪瘟基因 II 型自然变异流行株

时间：2021-02-26 点击：次来源：哈兽研作者：孙恩成，张振江，步志高等 - 小 + 大

2020 年，中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家非洲猪瘟专业实验室在开展非洲猪瘟流行病学监测及病原学研究中发现，我国部分省区出现了低致死率的非洲猪瘟基因 II 型自然变异流行株。这些变异株至少包括4种CD2v编码失活突变类型，导致病毒粒子失去吸附红细胞型；相比典型强毒致病力降低，但仍具有明显的残留毒力，较高剂量接种猪可引起亚急性、慢性病程和部分死亡，较低剂量感染则主要引起持续感染和慢性病程，具有很强的水平传播能力。这些变异株临床表现具有一定的隐蔽性，早期诊断难度加大，为我国非洲猪瘟防控带来全新的挑战，必须加以高度重视，尽快制定和采取应对策略。
（相关研究论文 “Emergence and prevalence of naturally occurring lower virulent African swine fever viruses in domestic pigs in China in 2020” 已于 2021 年 2 月 24 日在线预发表在 SCIENCE CHINA Life Sciences。）非洲猪瘟（African Swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African Swine Fever Virus，ASFV）引起的各年龄段家猪与野猪的急性、烈性、高度接触性且高发病率和死亡率的传染病，给养猪业带来严重的经济损失并威胁全球粮食安全。目前尚无商品化疫苗或有效的治疗方法。ASF 被世界动物卫生组织（OIE）列为应通报疾病，世界粮食及农业组织将其列为主要跨界动物疾病。该病 1914 年首次报道于非洲肯尼亚，1957 年从非洲传至葡萄牙，现在主要流行于非洲、东欧和亚洲，给世界范围内生猪产业带来巨大威胁。ASFV 结构复杂，在环境中极其稳定。ASFV 在家猪和野猪中长期流行传播，造成病毒遗传变异多样化。根据 B646L 基因（P72）可变 3'-末端的核苷酸序列，ASFV 已鉴定出至少 24 种基因型。目前，欧洲主要流行基因 I 和 II 型，而亚洲主要流行基因 II 型。
2018 年 8 月，ASF 传入我国并迅速扩散，给我国生猪产业造成了巨大的经济损失，尚无产业化应用的疫苗和药物，早期诊断及感染猪群扑杀是目前防控主要策略。流行病学监测及流行株的基因组变异、生物学表型及致病力研究对非洲猪瘟防控具有关键指导意义。中国农业科学院哈尔滨兽医研究所国家非洲猪瘟专业实验室于 2018年首次分离鉴定了我国第一株非洲猪瘟病毒Pig/HLJ/2018 （HLJ/18），动物回归试验证实 HLJ/18 感染家猪表现为急性病程及高度致死。非洲猪瘟已在我国流行了两年多，田间流行毒株的基因组变异及生物学和致病性表型进化亟待解析。
1、非洲猪瘟病毒监测
2020 年 6 月至 12 月，国家非洲猪瘟专业实验室按照农业农村部畜牧兽医局统一安排，执行《农业农村部畜牧兽医局关于调整部分省份非洲猪瘟监测工作的通知》及《农业农村部畜牧兽医局关于调整规模猪场等场所非洲猪瘟采样检测任务分工的通知》（农牧便函〔2020〕670 号）的要求，对黑龙江、吉林、辽宁、内蒙古以及陕西 5 省进行常态化非洲猪瘟主动监测与流行病学调查，总计采集并检测、分析病原学样品 3522 份；同时，对部分省市送检的138份疑似阳性样品进行了鉴定及检测。所有样本使用 OIE 推荐的 qPCR 方法对病毒 p72 基因进行检测。ASFV DNA 阳性样品利用猪原代肺泡巨噬细胞（PAM）进行病毒分离，最终成功分离到 22 株非洲猪瘟病毒（表 1）。
2、ASFV 分离株的遗传变异分析
为了分析 22 株病毒的遗传变异情况，选取 ASFV 重要的抗原基因、毒力决定基因和高突变区的 23 个 ORF 或区域进行了克隆测序。序列分析表明，所有分离株 B646L 基因（p72 蛋白）序列与 HLJ/18 一致，均属于基因 II 型。23 个 ORF 或区域中的 15 个未产生任何突变。而余下 8 个 ORF 或区域（MGF_110-14L、 MGF_110-1L、EP402R、CP530R、E199L、O174L、TRS 以及 A238L）存在不同程度的核苷酸突变和缺失、片段插入及小片段替换情况（图 1）。

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