六种家禽免疫抑制病及检测方法

一、家禽免疫抑制病概述

家禽的免疫抑制病原中最主要有传染性法氏囊病毒（IBDV）、马立克氏病毒 1型(MDV)、鸡传染性贫血病毒（CIAV）、J 亚群禽骨髓性白血病病毒（ALV-J）。此外，新城疫病毒（NDV）、禽流感病毒（AIV）、呼肠弧和网状内皮增殖病病毒也是免疫抑制性的，考虑到普遍性在本研究中重点关注前六种。

家禽免疫抑制病导致的直接损失和间接损失巨大（Van Elden et al., 2001）。此类家禽免疫抑制相关病传染性强，会引起免疫器官、组织和免疫细胞损害而导致暂时性或永久性免疫应答功能不全或低于正常水平，常会导致整个禽群的生产力下降，死亡率增加。免疫抑制相关病还会使疫苗接种不能达到预期免疫效果，导致免疫失败，家禽对其它感染性疾病的易感性增加，间接损失巨大。因此，关于家禽免疫抑制病的快速检测方法日渐成为研究的重点。

传染性法氏囊病是由传染性法氏囊病毒（Infectious Bursal Disease Virus，IBDV）所引起的一种具有急性、接触传染性的疾病，主要以法氏囊发炎、坏死、萎缩以及法氏囊内的淋巴细胞严重受损为特征，能够引起家禽的免疫机能障碍，而且会干扰各种疫苗的免疫效果。这种病的发病率很高，几乎达 100％，死亡率一般为 5％～15％，是目前养禽业面临的最重要的疾病之一。

鸡传染性贫血病是由鸡传染性贫血病毒(Avian Infectious Anaemia Virus，CIAV)引起的，以再生障碍性贫血、淋巴器官组织的萎缩、皮下和肌肉出血、泛血细胞减少为主要特征，本病存在于所有主要养禽业国家。1979 年首次于日本报道，中国于1992 年首次分离到该病病毒，随后周文平等在河南、山东省、江苏省、辽宁省、吉林省等地区的鸡群中也陆续分离到 CIAV。此病主要通过垂直传播、水平传播造成临床与亚临床的感染。鸡传染性贫血病及其诱发的疾病每年给养禽业造成巨大的经济损失。

J 亚群禽白血病是由 J 型禽白血病病毒(Avian Leukosis Virus subgroup J，ALV-J)所引起的一种传染病，该病主要发生于肉用型鸡，主要引起家禽的骨髓细胞瘤。我国于 1999 年首次分离到了 ALV-J。该病毒的致病性试验表明，其不仅通过髓细胞瘤引起肉鸡较高死亡率外，还可引起鸡体质量严重下降，雏鸡感染后其生长性能降低。

其可通过水平传播和垂直传播迅速地感染整个鸡群，使鸡群在短时间内遭受灭顶之灾。

马立克氏病是由疱疹病毒科鸡疱疹病毒 2 型(马立克氏病毒 1 型，Serotype  I Marek's Disease  Virus)引起的一种传染性肿瘤病。该病于 1907 年由匈牙利兽医病理学家马立克首次发现，是国外 50 年代以来最受重视的禽病，呈世界性分布，以淋巴组织增生和肿瘤形成为特征，产生免疫抑制,干扰各种疫苗的免疫效果。病毒经空气传播,传染力强,被感染禽类产生肿瘤和死亡,对养殖业造成了巨大经济损失。

新城疫（newcastle  disease,ND）是由新城疫病毒所引起的禽类传染病，该病是一种急性、热性、败血性和高度接触性的传染病。主要高热、呼吸困难、下痢、神经紊乱、黏膜和浆膜出血为特征。具有很高的发病率和病死率，是危害养禽业的一种主要传染病。

禽流感病毒（AIV）属甲型家禽免疫抑制性病毒（Gaidet et al., 2007）。禽流感病毒属于 RNA 病毒的正黏病毒科，传染性强，各种日龄禽类均易感，且易导致死亡，目前已经成为威胁动物和人类健康的重要病毒之一。

二、常见检测方法

上述疫病的现有检测方法（曲萌等，2003）主要有分离培养、电镜检查、琼脂扩散试验、病毒中和试验、酶联免疫吸附试验、PCR 等方法（赵静等，2002），其主要原理和优缺点主要有：传统的分离培养法通常是将病原体进行一定的倍比稀释后，根据其所需要的温度、时间、是否厌氧等特性进行模拟环境因素培养，最后在显微镜的镜下进行放大观察，根据观察到的形态和颜色等物理特征进行人工辨认。传统的分离培养法的优势是只需要培养器皿、显微镜等设备就可以进行，成本不高容易控制。劣势则是病原体的培养所需时间较长，一般会达到 3~6d；对操作人员的经验要求较高，没有一定经验基础的人员无法辨认或容易认错一些表型出现变异的毒株；部分检测工作的强度和难度很大，强度在于对所需确认的每种类型都需要一一进行分离培养，难度在于有时需要模拟一些特殊苛刻的培养要求。

电镜检查法电镜检查法的成像原理和光学显微镜大致一样，但是也有所区别。

电镜的优势是主要是通过电子扫描制备的复杂样品来进行成像，其分辨率很高可以容易到达纳米级别，劣势是图像为黑白的，而且实际看到的只是样品的在某一时刻拍的静止照片，同时在制备样品时过程比较复杂，对条件的要求也比较高，而光学显微镜的优势则是可以进行动态和实时的查看，劣势是分辨率受到了入射光的衍射限制，如果被观察对象的大小小于入射光的波长的一半就无法看到。两者之间各有长短，常常在工作中结合具体实际应用情况来进行。

琼脂扩散试验琼脂扩散试验的实质是一种沉淀实验，主要利用可溶性的抗原、抗体的分子在半固态的琼脂凝胶的过程中相遇后达到一定比例，产生结合和凝集并形成白色可见的沉淀，这种沉淀能被肉眼所观测到。琼脂扩散试验是一种非常简洁、快速的病原体诊断和抗体效价测定方法（罗平恒等，2013），其主要优势是可以用做定性实验或者要求不太精确的定量实验，实验结果简单清晰。劣势是需要的时间比较长，而且反应的灵敏度不够高，其结果是通过比对标准曲线来人工求得，所以不如 ELISA 实验客观。

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