浅谈PCR实验室环境污染的监控措施及规范化操作流程

非瘟防控，岂容“烽火戏诸侯”？

——浅谈PCR实验室环境污染的监控措施及规范化操作流程

编者按：不以规矩，不能成方圆。实验室环境污染的监控措施及规范化操作流程都是经过长期实践、广泛验证的有效措施，我们只要高度重视、规范化操作就能大幅度降低管理中的风险。毫无疑问，实验室的检测、监测在防控非洲猪瘟方面起到了非常重要的作用！王长年、赵俊娜分享《非瘟防控，岂容“烽火戏诸侯”？——浅谈PCR实验室环境污染的监控措施及规范化操作流程》，推动实验室标准化与规范化运行。

摘要：随着非洲猪瘟（ASF）的来袭，国内荧光定量PCR实验室如雨后春笋般地快速发展。荧光定量PCR方法已成为ASF防控过程中最常见的手段。我们通过调查发现：随着检测量的增加，各实验室的环境污染问题日益突出。2019年初，仇华吉研究员多次在国内ASF防控会议上，从专家的角度呼吁大家在做ASF检测和监测时，务必要防止实验室本身所造成的污染问题。

自此，如何建立实验室，如何防止实验室的污染问题也逐渐引起了大家的关注和重视！我们通过与诸多实验室共同地努力和不断地优化，逐步建立了一套荧光定量PCR实验室的环境污染监控和处理方法，分享给同行，供大家参考。

关键词：PCR实验室 环境污染 监控系统 SOP

荧光定量PCR技术在国内兽医体系的大量应用，多半是为了防控非洲猪瘟（ASF）。所以很多实验室都是为了应对ASF疫情而仓促上马的，设计不合理、运行不规范，经常会出现实验室污染问题；而这些问题往往未能得到足够的重视，导致出现“阴性对照不成立、甚至出现假阳性”的错误结果。为有效地控制PCR实验室污染，我们通过对实验室的设计和布局、实验室环境污染监控体系的建立以及相关问题的处置、人员的培训等方面来提高PCR实验室检测水平。

1 实验室的设计和布局

1.1 关于PCR实验室的设计和布局

PCR实验室设计的科学与合理是保证实验结果准确的必备条件。我们常见一些实验室由于在设计上的缺陷，导致实验室的环境污染难以去除，甚至不能再进行PCR检测或不愿意使用高敏感的试剂盒来检测（“鸵鸟策略”）！

标准化的 PCR 实验室设计最主要考虑的两个方面：

1、各区独立

2、注意风向

PCR实验室的分区我们按照污染程度来划分：可分为试剂准备区-核酸提取区- PCR扩增区，普通的PCR实验室还有产物分析区，其污染程度依次增大。PCR实验室各个相对独立的区域内要做好正负压的控制，简易的实验室可以安装不同数量的排风扇来实现不同区域的压差。严格分区还要注意实验室内的空气在不同区域的流向问题。我们要防止扩增产物顺空气气流进入上游扩增前的 “洁净” 区域。所以，实验室科学的通风设计在去除气溶胶污染方面是非常有帮助的！

1.2 PCR实验室的设计中常见的一些错误

我们参观和了解过许多实验室，发现有些PCR实验室的设计存在严重的问题。下面是一些常见的设计错误，希望能够引起大家的注意。

1) 中央空调互通：这样就造成实验室各区域的互通，非常容易造成整个实验室的污染，进而不能使用。所以，需要在各区域另行安装分体式空调或者安装PCR实验室专用的分区通风系统。

2) 隔断不密封：有些实验室在分区设计时，只是考虑实验室在形式上的分区（各区分割不完全，有相通之处；各区之间无缓冲间；或者即便有缓冲间，却在装修时采用家庭装修模式-吊轨式推拉门或者平开门，门的下面留有缝隙等等）。

3) 传递窗不密封：如果传递窗不密封，虽然有时方便了试剂、物品在不同实验区间的传递，但同时也增加了交叉污染的风险。一个合格的传递窗应是双开门且密封严实，并且两边的门最好设置连锁装置控制（即一次只能开启一扇门）。此外，传递窗内应配有紫外灯照射装置，并在每次使用后立即进行照射。

2 实验室环境污染的监控体系

建立以及相关问题的处置方法

2.1 PCR实验室环境污染监控的重点

PCR实验室环境污染监控和猪场环境监控的关注点是不一样的。在实验室层面，主要是关注产物和气溶胶的核酸污染问题；而在猪场，则关注对病毒污染的监测。所以，我们对于PCR实验室的监测关注点在重点区域和关键仪器设备方面。

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