动物源性食品中青霉素类药物残留检测

近几十年来抗生素，尤其是β-内酰胺类抗生素，由于其在人类医学和兽药学上有效地预防和治疗各种传染性疾病而备受关注。青霉素属于β-内酰胺类抗生素，由于其药效高、价格低廉、使用方便，已成为临床上治疗细菌感染最常用的抗生素，在畜牧兽医水产养殖领域也得到了广泛的应用。同时，抗生素残留也成为国际贸易的壁垒。欧盟指令NO.2377/90/EEC对青霉素类抗生素在动物源性食品中的残留进行了严格限制。所以对动物源性食品中此类抗生素残留的有效监测已经成为保障食品安全的一个重要环节。为满足残留检测的需要，建立一种动物源性食品中青霉素类抗生素残留的分析方法非常重要。

中国肉类食品综合研究中心的马燕红，王 妍，李志刚等人旨在建立一种动物源性食品中青霉素G、苯唑西林、乙氧萘青霉素、双氯青霉素4 种青霉素类药物的高效液相色谱检测方法。采用乙腈-水提取目标化合物，HLB固相萃取柱净化，高效液相色谱法对不同基质中4 种青霉素类药物进行测定，并验证了所建方法的选择性、准确性、稳定性和灵敏性。

1、仪器条件的优化

本实验在大量文献和前期工作的基础上，对比乙腈-水、乙腈-0.02 mol/L乙酸铵溶液、乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液和乙腈-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液作为流动相，标准物质出峰的半峰宽、分离度、保留因子等参数情况。结果表明：采用乙腈-水为流动相进行实验时，溶剂峰严重拖尾，且化合物不出峰，原因可能是流动相中不含盐，与固定相无保留；在流动相中加入盐后，化合物与固定相作用，可以正常出峰，但乙腈-0.02 mol/L乙酸铵溶液为流动相时，色谱峰的半峰宽大于乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液为流动相时的峰宽；加大盐的浓度，峰形变窄，变尖。但考虑到盐浓度增大在色谱柱中易结晶，影响色谱柱寿命，本实验选取乙腈-0.02 mol/L磷酸二氢钾溶液作为流动相。

2、提取条件的选取

2.1 提取溶剂的选择：用乙腈和乙腈-水（10∶1，V/V）作提取溶剂时，回收率均在90%左右，后者回收率略高，其他2 组回收率较低。可能是由于乙腈提取时沉淀蛋白完全，易于离心分离，提前加入水能先溶解目标化合物。故本实验选取乙腈-水（10∶1，V/V）作为提取溶剂。

2.2 SPE柱的选择：本实验比较了这2 种SPE柱在相同条件下的回收率。加标量为50 μg/kg，3 mL甲醇、3 mL水活化，上样，水淋洗后抽干，最后用2 mL甲醇＋2 mL乙腈洗脱，N2吹干后乙腈复溶。HLB柱对目标化合物的回收率均高于C18柱。

2.3 SPE洗脱条件的优化：洗脱液为2 mL甲醇＋2 mL乙腈时，4 种化合物的回收率明显提高。当在活化和淋洗剂中加入碱性磷酸缓冲盐时，回收率达到了90%左右。可能是碱性磷酸盐缓冲液防止待测物降解。最终确定SPE萃取小柱的最佳条件为：选取HLB萃取柱，采用方案4的方式净化。

3、方法的验证

3.1 标准曲线、检出限和定量限结果：各目标化合物标准曲线的相关系数均大于0.999，显示了良好的相关性。检出限和定量限采用空白样品中添加青霉素类化合物的方法，分别以信噪比不小于3和信噪比不小于10计算。各青霉素的检出限为3 μg/kg，定量限为10 μg/kg，可以满足青霉素类化合物的定性及定量测定要求。

3.2 精密度测定结果：在空白猪肉样品中进行精密度实验，样品添加不同含量的标准溶液后，涡旋混匀，于室温放置10 min，使待测成分与样品机体成分互相作用达到平衡，做6 次重复实验，测定结果的相对标准偏差在10%以内。

3.3 回收率测定结果：在不同的基质中，3 个水平的回收率在69.9%～100.3%范围内。从精密度和回收率的结果可以得出，该方法有较高的准确性和可靠性。

实际样品验证：从市场中选取5 种基质进行方法验证，分别为猪肉、牛肉、羊肉、鸡肉、草鱼，目标化合物出峰处均无干扰、未检测出4 种青霉素类药物残留。

4、结论

本实验以水合氨苄青霉素作为内标，建立一种高效液相色谱法检测动物源性食品中的青霉素G钾盐、苯唑西林、乙氧萘青霉素、双氯青霉素4 种青霉素类药物残留量的方法。采用直接进样，无需衍生化，内标法定量提高了回收率。该方法前处理简单、快速、准确、灵敏，可以满足实际检测分析的需要。