黄芪多糖注射液生物活性检测方法的分析与评价

黄芪多糖是从传统中药黄芪中提取的有效成分，研究表明，黄芪多糖不仅可以促进动物免疫器官的发育，增加免疫细胞的数量，而且还能提高免疫细胞的功能，增强疫苗的免疫效果，从而起到提高自身免疫力、抵抗致病微生物侵袭的作用。李朝辉等研究表明，在1日龄雏鸡日粮中添加黄芪多糖可以有效促进免疫器官的发育，提高外周血中免疫球蛋白含量和 T淋巴细胞数量。 闫春贤在黄芪多糖对ROSS308 肉仔鸡生长的影响实验中发现，黄芪多糖对体重增加不太明显，对免疫器官的增重前期有降低，后期有明显增重。徐端红等在研究中同样发现，黄芪多糖可以增强断奶羔羊的免疫球蛋白的水平，提高抗病能力。 宣小龙在黄芪多糖提高干奶期奶牛乳腺免疫力的研究中发现，使用黄芪多糖可以提高干奶期奶牛乳腺免疫力能达到很好效果，并且对干奶期前的预防效果也很好。高扬在研究中表明，饲料中添加不同水平的黄芪多糖，可以不同程度地提高脾脏系数。在养殖业中将黄芪多糖作为饲料添加剂，可提高畜禽免疫力、促进饲料吸收利用，并提高畜产品质量。侯晓礁等研究发现，在妊娠后期母猪饲料中添加黄芪多糖粉，可以有效提高妊娠母猪的窝均产仔数、窝均活仔数和窝均活仔质量。然而，对于黄芪多糖的质量检测方面的研究相对较少，过去主要侧重于含量的测定以及性状鉴别上。2013年《兽药国家标准（化学药品、中药卷）》第一册首次将黄芪多糖生物活性检测列为商品化黄芪多糖注射液的检验项目，《中国兽药典 2015版（二部）》首次将其生物活性检测纳入黄芪多糖注射液的必检项目。目前，关于黄芪多糖注射液生物活性检测方面的报道很少，特别是对其方法的分析与评价还未见报道。本试验采用《中国兽药典 2015版（二部）》提供的方法，对河南省4家兽药厂提供的黄芪多糖样品进行了生物活性检测，并增加了胸腺项目检测作为参考；对检测结果进行统计处理，对黄芪多糖生物活性现实检测方法进行分析和评价，期望为今后黄芪多糖注射液生物活性检测方法的应用与改进提供参考。  

1 材料与方法  

1.1 材料  

1.1.1 试验动物 

昆明鼠，SPF级，体重 18-20 g，雌雄各半，质量合格证号为：NO.41003100005184，购自河南省实验动物中心；SPF级全价饲料，购自河南省实验动物中心。屏障环境饲养，环境温度24-25℃ ，相对湿度40％-50％；垫料每周更换3次，提供充足的无菌饮水。  

1.1.2 试验仪器和药品 

精密分析天平（AB204－N），梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司生产；一次性使用无菌注射器（型号 1ml），河南曙光健士医疗器械集团股份有限公司生产；4种黄芪多糖样品，规格：以葡萄糖（C6H12O6）计 10ml:0.1g，由河南省各兽药厂提供；生理盐水，河南科伦药业有限公司生产。  

1.2 方法  

1.2.1 试验设计 

本试验选用4种黄芪多糖样品（A、B、C、D），每种样品各自独立进行试验设计，均设试验组和对照组。在对每一种样品进行检测试  验时，选择 16只体重相近的昆明鼠，将其随机分为2 组，每组8只，一组为试验组，另一组为对照组，整个试验共用昆明鼠64只。4试验组分别用4种黄芪多糖样品处理，每天每只腹腔注射黄芪多糖0.5ML，连续注射7D；4个对照组每只昆明鼠注射等量的生理盐水。  

1.2.2 脾指数和胸腺指数的计算 

最后一次注射黄芪多糖注射液 24h后处死昆明鼠，依次称量每只昆明鼠的体重、脾脏重和胸腺重，并计算脾指数和胸腺指数。 脾指数 ＝ 脾脏重（mg）/体重（g）；胸腺  指数＝胸腺重（mg）/ 体重（g）。 再进一步采用简单算术平均法计算各组的平均脾指数和平均胸腺指数。 按照《中国兽药典 2015版（二部）》 提供的方法判定样品是否合格，即：试验组与对照组平均脾指数之差大于或等于2为合格，小于 2 为不合格。  

1.2.3 统计分析方法 

试验组与对照组间各项目的显著性检验采用T检验法；胸腺重与脾脏重之间、两种指数之间的相关性分析采用相关系数法，4种样品间的差异显著性检验采用单因素方差分析  法，多重比较采用Duncan新复极差法。  

1.2.4 所用软件 

使用Excel2010 软件进行初步数据统计、T检验和相关系数计算；使用DPS7.05 软件进行方差分析和多重比较。 文中P＜0.05用*表示，P＜0.01 用**表示。  

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