布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展

2.3.3 核酸探针检测

核酸探针技术是利用核苷酸严格配对原理发展起来的核酸探针杂交技术，是目前分子生物学中应用最广泛的技术之一。该方法灵敏度高，特异性好，操作简便，可以一次性检测大批量样本，适合用于临床样本检测和流行病学调查。由于核酸探针可以多次重复利用，大大降低了检测成本。

王希良等人制备的布鲁氏菌核酸探针检测布病，显示出很好的特异性和灵敏性，利用地高辛标记探针，建立的Dot-blot最低可检出5pg的核酸。Mater制备的地高辛标记探针，完全可以用于血清学阳性和慢性病人血清的布鲁氏菌病的检测，并且具有较强的特异性。2000年，Fernández用牛布鲁氏菌16S rRNA序列制备的3种核酸探针能够鉴别诊断了部分猪种布鲁氏菌与其他布鲁氏菌，显示出重要的应用价值。

2.3.4 环介导等温扩增技术(LAMP)

与PCR检测技术类似，LAMP也是通过特异性的扩增布鲁氏菌核苷酸序列对检测病原做出判断。

潘文等人建立了针对布鲁氏菌omp25基因的可视化LAMP检测方法，对S19株、S2、M5三株布鲁氏菌疫苗检测，结果显示出很好的扩增效果。许邹亮等人建立的LAMP检测方法，最低可检出17fg的DNA，显示出良好的灵敏性。刘玉梅用建立的LAMP和RT-PCR对10份布鲁氏菌病阳性血清的检测结果进行了比较，结果发现LAMP与RT-PCR有同样的灵敏度和特异性，且LAMP方法更快速、简便，经济，无需专用仪器设备，更适用于基层医院对布鲁氏菌的快速检测。赵志兵建立的LAMP法，具有高度的特异性和灵敏性，对17种常见菌株的扩增结果为阴性，对S2、M5、104 M、55226四种布鲁氏菌疫苗株灵敏度分别达到5×10-4ng/μL、5×10-5ng/μL、5×10-3ng/μL和5×10-4ng/μL，并且在30 min以内完成检测。该方法快速、灵敏、特异，有望成为快速检测布鲁氏菌的有效手段。 

随着分子生物学技术的进步，新型的可视化LAMP方法表现出越来越多的优势，不仅对设备要求不高，而且容易操作，特别是肉眼可见的阳性结果，一步判定结果，降低了布病检测的危险性，适合在基层推广应用。

3 总结

综上所述，国内外布鲁氏菌病的实验室诊断方法较多，主要还是免疫学的RMBP、SAT、CFT、GICA、ELISA和MRT，以及分子生物学的PCR、核酸探针检测和LAMP，这些方法各有优点和不足，可以根据工作需要选择几种方法结合使用。目前，随着ELISA和分子生物学技术的快速发展，其灵敏性高、特异性强、操作简便等优势越来越凸显，逐渐成为布鲁氏菌病检测的重要手段。但开发特异、灵敏、能鉴别诊断自然感染与疫苗免疫的检测方法仍然是目前亟待解决的问题。

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