布鲁氏菌病实验室诊断方法研究进展

编者按：布鲁氏菌病 (Brucellosis)简称布病，也称马耳他热，是由布鲁氏菌属(Brucella)细菌引起的一种人畜共患传染病。临床上主要引起人的波状热和慢性感染，引起怀孕母畜流产、死胎，公畜发生睾丸炎等，给人的健康和畜牧业的发展带来严重危害。近年来，我国布鲁氏菌病在人间和畜间的流行传播呈上升趋势，严重威胁着人们的健康和畜牧业生产。及时准确地诊断布鲁氏菌病对该病的防治和净化具有重要的现实意义，本文主要是结合布鲁氏菌病的危害，对布鲁氏菌病的实验室诊断方法研究进展进行概述，以供参考。

布鲁氏菌病 (Brucellosis)是由布鲁氏杆菌引起人和动物共患的慢性传染病。布鲁氏杆菌是一种革兰氏阴性、胞内寄生菌。1886年，英国军医Bruce从一名因“马耳他热”死亡的士兵脾脏中分离确认。根据布鲁氏菌的病原性和生化特性将该布病分为6个种20个生物型，包括3个羊布鲁氏菌(Br.melitensis)、9个牛种布鲁氏菌(Br.abortus)、5个猪布鲁氏菌(Br.suis)、1个绵羊附睾种布鲁氏菌(Br.ovis)、1个沙林鼠布鲁氏菌(Br.neotomae)、1个犬布鲁氏菌(Br.canis)[1]。目前，还发现了生物学特性有别于前面6种布鲁氏菌的海洋鲸型海洋种(Br.ceti)和鳍型海洋种(Br.pinnipedialis)[2]。

1 布鲁氏菌病的危害

布鲁氏菌病可以感染多种动物和人，包括家畜、人和野生动物。发病及带菌动物是主要的传染源。患病动物的分泌物、排泄物、流产胎儿及乳汁等含有大量病菌，患病公畜精液中也含有病菌。在已知的6种布鲁氏菌中，牛种、羊种、猪种布鲁氏菌对人有较强的致病力和侵袭性，但以羊种布病感染最为严重。临床上母畜感染后主要表现为流产、死胎或者弱胎，母畜流产后会发生子宫炎或者脓肿导致生育能力下降。公畜感染后多表现为睾丸炎和附睾炎，导致配种能力下降[1-3]。

人感染布鲁氏菌病主要是因为过多的接触患布病动物(如猪、牛、羊等)及其动物产品引起的。急性感染后常表现为发热、多汗、关节痛、神经痛及肝脾肿大，慢性感染则多表现为关节疼痛。目前，该病在世界各地均有不同程度的流行，给发生国家和地区造成了巨大的经济损失。

2 布鲁氏菌病诊断技术

2.1 病原学诊断

病原学检测是诊断布鲁氏菌病的“金标准”。主要包括病料的采集、保存、分离培养和鉴定等。试验通常在无菌条件下取流产胎儿、胎盘、阴道分泌物或者乳汁，直接镜检或者接种于肝汤琼脂培养基等固体培养基，根据菌落的形态特征、生化反应及染色特点进行判断。布鲁氏菌多用科兹洛夫斯基染色法染色，显微镜下为红色球状小杆菌，散在分布，偶见成对、短链或串状排列。但由于病原的分离率低，加上培养时间长，常常影响该病的及时诊断，加上该病对实验室人员和环境要求较高，该方法不适合用于临床快速诊断。

2.2 免疫学诊断

血清学诊断方法是免疫学诊断方法中最常用的检测方法。包括虎红平板凝集试验(RBPT)、试管凝集试验(SAT)、补体结合试验(CFT)、胶体金标试验(GICA)、酶联免疫吸附试验(ELISA)等。还有专门用于检测乳用动物布病的全乳环状凝集试验(MRT)。

2.2.1 虎红平板凝集试验(RBPT)

虎红平板凝集试验是国际贸易中牛、羊、猪布鲁氏菌病检测的指定试验，在我国也用于人布鲁氏菌病监测的初筛。抗原是经培养灭活后，离心收集菌体用虎红染料染色后悬浮于乳酸缓冲液中制成。该方法灵敏度高，操作方便，检测快速且价格便宜，适于动物群体布鲁氏菌病的普查。

2.2.2 试管凝集试验(SAT)

SAT是布病的确诊试验之一，与RBPT相比，该方法准确性高，可以定量测定抗体水平，具有较高的特异性，能够识别IgM抗体，可以用于布病的早期诊断。需要注意的是，RBPT和SAT都属于凝集试验，SAT通过识别布鲁氏菌LPS-O链抗原进行反应，而LPS-O链抗原是多种革兰氏阴性菌的共同抗原，因此SAT无法鉴别布鲁氏菌与其他革兰氏阴性菌存在的交叉感染。另外，该方法操作繁琐，反应时间长，不适用于现场疫情快速诊断。

2.2.3 补体结合试验(CFT)

补体结合试验主要通过观察绵羊红细胞是否发生溶血来判断受检血清中有无待检抗体[5]。该方法灵敏性高，特异性强，对于牛、羊、绵羊附睾种布病的临床诊断具有较高的应用价值。特别是对于RBPT初筛阳性或者SAT诊断可疑的均可用CFT进行确诊。但是由于猪补体能够干扰豚鼠补体，导致实验敏感性下降38%左右，因此不适用于猪布病诊断。

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