最新药物防控非洲猪瘟研究进展（一）

用(A) 伊曲康唑（ITZ）或(B) 25-羟基胆固醇（25-HC）预处理Vero细胞，用Ba71V或Bp30GFP感染16hpi。用流式细胞仪检测感染细胞，用溶剂二甲基亚砜或乙醇处理的细胞来进行百分比标准化。误差线表示为三个独立实验的标准差。统计显著性差异用星号表示(*** p < 0.001, ** p < 0.01; * p < 0.05)。

为了证实抑制非洲猪瘟病毒感染的效应或ITZ与OSBP有关，受感染的细胞用25-HC预处理，25-HC是OSBP的一种高亲和力配体，可抑制OSBP介导的胆固醇转移。我们发现了类似的结果，如图3B所示。添加25-HC显著减少了约70%的非洲猪瘟病毒感染，其效果在感染后期更加显著。

随后我们评估了其他感染参数。病毒蛋白的表达通过受感染的Vero细胞提取物的Western blotting分析，病毒DNA复制的实时荧光定量PCR分析，均在16 hpi。与用二甲基亚砜处理的细胞相比，用ITZ处理的细胞中的病毒蛋白产生量p30和p72减少（图2A）。正如预期的那样，其他感染参数均减少（图2B），病毒滴度降低约1 log（图2C）。

图2 (A) western blot实验显示伊曲康唑（ITZ）处理降低了BA71V感染后病毒蛋白表达。(B) 实时荧光定量PCR实验显示非洲猪瘟病毒基因组拷贝数减少(C)在BA71V感染Vero细胞24 hpi时，通过菌斑分析伊曲康唑（ITZ）对病毒滴度的影响。误差线显示三个独立实验的标准差。统计显著性差异用星号表示（***p<0.0001，***p<0.001，**p<0.01）。

我们发现ITZ处理降低了非洲猪瘟病毒感染性和病毒复制。ITZ几乎不影响GFP阳性的感染细胞，但显著降低了晚期p72蛋白的表达。由于GFP在早期蛋白p30启动子的控制下表达，这些结果表明，ITZ不影响病毒进入或早期基因表达。我们的研究结果表明，与其他病毒性疾病类似，这种效应可能是由于向病毒复制部位供应的脂质减少所致。

最近的一项研究表明，ITZ通过靶向氧甾醇结合蛋白（OSBP）和OSBP相关蛋白4（ORP4）来抑制肠道病毒和丙型肝炎（HCV）的复制。ITZ与OSBP的直接结合，定位于病毒复制细胞器，破坏其脂质转运功能，这就可以解释ITZ的抗病毒作用。

为了验证OSBP是非洲猪瘟病毒感染的相关靶点，用25-HC预处理感染细胞。25-HC与OSBP结合，具有很高的亲和力，可作为OSBP胆固醇转移的抑制剂。我们发现25-HC也能显著抑制非洲猪瘟病毒感染。

这些结果以及胆固醇对非洲猪瘟病毒产生感染性至关重要的事实表明，在这种特定情况下，ITZ和25-HC的抗病毒活性可能是由于阻断了胆固醇通向病毒工厂的通路，这意味着非洲猪瘟病毒严格依赖于这些脂质供应进行复制。一直以来，我们发现使用ITZ可以减少病毒工厂周围的胆固醇积累。然而，ITZ不影响与脂质转运相关的其他蛋白在膜接触位点的表达或定位，如ACBD3、PI4K。

本研究显示，ITZ和25-HC降低了非洲猪瘟病毒的复制，但没有完全阻止病毒周期的进展。

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