非洲猪瘟防控综述

6.2.3　重组致弱毒株

采用分子生物学方法, 敲除病毒功能基因、病毒毒力基因或者免疫抑制基因, 可降低病毒毒力或增加机体对病毒的免疫应答, 研制比传统弱毒疫苗安全性更好且效力更高的基因工程减毒活疫苗。研究表明, 一些ASFV毒株在缺失单个或多个毒力基因/或免疫抑制基因后, 如TK (K196R) 、9GL (B119L) 、CD2v (EP402R) 、DP148R、NL (DP71L) 、UK (DP96R) 和多基因家族360和505 (MGF 360/505) , 缺失毒株接种宿主毒力减弱且可诱导产生针对同源母本毒株或异源毒株的特异性免疫保护 (表1)。ASFV编码多种蛋白以干扰宿主免疫系统, 已报道的病毒免疫逃逸相关基因包括A238L、A179L、A224L、DP71L、MGF360/505、I329L、K205R、D96R、DP148R、A276R、D96R和EP153R等, 其编码蛋白抑制宿主细胞Ⅰ型干扰素和ISGs的产生, 调控细胞凋亡、蛋白合成和自噬等多种信号通路。由于这些蛋白质可干扰宿主免疫应答, 从ASFV强毒株中缺失上述基因有助于增强宿主免疫应答 (表1) 。

安全性和有效性是影响ASF弱毒活疫苗田间应用的重要因素, 安全性和有效性与病毒毒株、免疫或感染剂量、病毒接种途径以及接种动物密切相关。因此, 致弱毒株保护性的强弱、是否有毒力残留和是否导致持续感染是弱毒活毒株能否成为候选疫苗毒株的重要决定因素。因此, 还需要进一步研究以确定适合的缺失靶基因及其组合, 以研制可诱导保护性免疫反应且没有相应副作用的ASFV弱毒活疫苗。

6.3　病毒活载体疫苗

已有研究表明, 细胞免疫和体液免疫在抗ASFV感染中发挥作用。有学者将ASFV保护性抗原重组入腺病毒或痘病毒载体, 以期获得更好的细胞免疫和CTL反应。Lokhandwala等将ASFV p32、p54、p72和pp62基因分别重组入人腺病毒Ad5载体中进行“鸡尾酒”式免疫, 获得了良好的抗原特异性CTL反应;之后他们又将ASFV A151R、B119L、B602L、EP402RΔPRR、B438L和K205R-A104R共7个ASFV抗原基因, 重组入复制缺陷型腺病毒载体, 通过“鸡尾酒”式混合免疫后能够诱导强烈体液免疫反应和细胞免疫应答。上述研究仍需通过攻毒保护试验, 进一步验证病毒活载体疫苗在ASF疫苗开发中的可行性。

6.4　核酸疫苗

ASF核酸疫苗的研究刚刚起步, 通过将编码病毒主要抗原的基因克隆入真核表达载体后, 直接导入机体内, 在宿主细胞内完成转录翻译后产生抗原蛋白, 从而同时激活体液免疫和细胞免疫应答。Argilaguet等将ASFV p72、p30和p54基因克隆入真核表达载体, 制备ASF DNA疫苗, 但该DNA疫苗免疫猪后并不能够提供攻毒保护。同组科研人员将ASFV p30和p54基因与猪白细胞抗原II的特异性抗体单链可变区基因在真核表达载体中融合表达;接种ASF DNA疫苗后, 在没有诱导产生可检测水平ASFV抗体的情况下, 能够使部分动物获得攻毒免疫保护, 表明细胞免疫在ASFV疫苗的免疫中起重要作用。最新研究表明, 根据一个或两个ASFV抗原构建的DNA疫苗并不能诱导较高免疫保护, 而免疫ASFV基因组DNA质粒表达文库能够提供60%的保护力, 说明有待于发掘更多保护性抗原, 以提高核酸疫苗的保护水平。

6.5　亚单位疫苗

ASF亚单位疫苗只包含特定的病毒抗原, 需通过合适抗原传递系统免疫动物。鉴定可以引起强烈的免疫应答的抗原及其表位, 有助于开发有效的ASFV亚单位疫苗。研究表明, 针对病毒p30蛋白的抗体在细胞水平抑制超过95%的ASFV内化, p72和p54的抗体能够抑制病毒吸附, 表明这些蛋白在ASFV感染中发挥作用。用重组p30或p54蛋白免疫猪后可以诱导中和抗体的产生, 但不能提供针对急性ASF感染的保护[32];相比之下, 同时免疫p30和p54蛋白或两种蛋白的嵌合体可以提供部分保护。用杆状病毒表达系统制备的ASFV结构蛋白p72、p30和p54等, 以蛋白复合物作为抗原免疫动物后仍不能提供有效的免疫攻毒保护, 说明仅仅依靠上述抗原刺激产生的中和抗体很难获得理想的免疫保护效果。在另一组研究中, Lopera-Madrid等分别以人源293 (HEK) 细胞表达的ASFV B646L (p72) 、E183L (p54) 和O61R (p12) 亚单位抗原, 或者痘苗病毒载体疫苗进行首免和加强免疫, 获得较好的体液免疫和细胞免疫水平。因此, 需要研究鉴定更多的ASFV保护性抗原、开发新型免疫佐剂以及采用DNA首免蛋白质加强免疫策略, 以提高ASF基因工程亚单位疫苗的免疫效力。

7　公共卫生

ASFV不会感染人，也不会直接对公共卫生造成危害。但是，ASFV对猪及猪产品、食品安全有很重要的社会和经济影响，特别是在那些以猪产品为主要蛋白质来源的国家。

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