我国部分猪场猪圆环病毒3型流行病学调查

猪圆环病毒（Porcine circovirus，PCV）是目前最小的单链环状 DNA 病毒，从发现第 1 株 PCV到现在已经有 35 年。根据 PCV 基因组和致病性不同，PCV 可以分为 PCV-1、PCV-2 和 PCV-3 3 个亚型。PCV-1 感染猪后不引起任何临床症状；PCV-2 感染猪后则会引起断奶仔猪多系统衰竭综合症（PMWS）、皮炎性肾病、渐进性消瘦、生长发育不良等多种临床症状复杂的疫病；PCV-3 是一种从猪体内鉴定的新亚型，其临床症状和致病机制尚不明确。从宿主和感染类型来看，3 种 PCV亚型存在较大差异。PCV-1 主要存在于 PK15 等一些传代细胞系中，但不引起明显的细胞病变；PCV-2 是目前猪群中最常见的引起临床感染和发病的类型，广泛存在于世界各地猪场；PCV-3 自2016 年发现以来，已先后有美国、中国、韩国、波兰、巴西等国家陆续报道发现。PCV-3 感染率和流行率的快速增长，引起了人们的关注。但遗憾的是，感染 PCV-3 的猪只仅表现生长不良，其他临床症状并不明显。通过组织病理学检查，仅可看到病猪的心脏和多系统炎性浸润等病理变化。但这些症状和病理变化并不是猪感染 PCV-3 后引起的特征性病变，加上 PCV-3 分离培养较困难，病原检测手段还不完善，因此 PCV-3 的诊断有很大困难，对其预防和控制更加不易。为此，本研究收集了我国部分猪场 PCV-3 的流行病学背景资料，利用荧光 PCR 方法开展了 PCV-3 被动监测，深入分析了 PCV-3 感染与临床症状的关系，以及PCV-3 感染与仔猪年龄的相关性等，为后续研究提供了技术支持。

1　材料与方法

1.1 样品和病毒

80 份猪临床发病样品：来自福建、山东、河南等 10 个省份的猪群，其中 ：67 份样品明确记录了采样猪的腹泻、发热或呼吸道症状等临床表现，13 份样品没有任何相关症状记录；51 份样品记录了采样仔猪日龄（表 1）。PCV-3 阳性样品（编号SD66）：本实验室（中国动物卫生与流行病学中心畜病监测室）鉴定和保存。

1.2 主要试剂

Real Time Taq 试剂盒（RR390A）：宝生物工程（大连）有限公司产品；病毒 DNA 提取试剂盒（DNAZol）：Life 公司产品。

1.3 检测方法

以本实验室建立的 Taqman 荧 光 PCR 作为 PCV-3 的检测方法。该方法的上游引物为PCV3-F110：5'- gatgatgaagcggcctcgtgttttga-3'；下游引物为 PCV3-R284：5'- tcggtcggggtccagttgtttatcgta -3'；探针为 5'-FAM-caccccgcaaaaatcacgcaaacc-BHQ1-3'。引物与探针均由宝生物工程（大连）有限公司合成。

1.4　检测程序

根据 DNAzol 说明书，从猪样品中提取总基因组 DNA，分别进行 PCV-3 荧光 PCR。荧光 PCR反应体系包括：Premix EX-Taq 反应液 12.5 μL，上游引物（10 μmol/L）、下游引物（10 μmol/L）和荧光探针（5 μmol/L）各 1 μL，DNA 标准品 2 μL，用 ddH2O 补充至 25 μL。荧光 PCR 反应扩增条件为：95 ℃预变性 3 min，45 个扩增循环（95 ℃ 5 s，60 ℃ 14 s），60 ℃读取荧光。

1.5　统计分析

根据荧光 PCR 检测结果和病料背景资料，进行流行病学和统计学分析。

2　结果

2.1　样品中的 PCV-3 检测

在检测结果的判定中，Ct 值＜ 35 的样品判断为阳性样品，≥ 35 且＜ 37 的判断为可疑样品，≥ 37 的判断为阴性样品。可疑样品重复检测 1 次，如仍≥ 35 且＜ 37 则判为阳性。在本研究采集的80 份猪样品中，利用荧光 PCR 检测方法，共检测出 22 份阳性，阳性检出率为 27.50%（图 1）。

图1 荧光探针 PCR 方法检测临床样品 PCV-3 的结果

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