2017年湖南省永州市活禽市场禽流感污染状况调查

禽流感（Avian influenza，AI）是由甲型禽流感病毒（Avian influenza virus，AIV）引起的一种禽类传染病，可导致火鸡、鸡、鸽子、珍珠鸡、鹌鹑等陆禽发病，其中火鸡和鸡对其最易感，引起的发病率和死亡率较高。鸭和鹅等水禽是 AIV 的自然宿主，可隐性带毒。研究发现 AIV 可在水禽消化道中繁殖，并且不同亚型病毒在体内可不断重组变异。AIV 根据致病性不同可分为高致病性和低致病性两种，其中 H5、H7 亚型为高致病性。世界动物卫生组织（OIE）将高致病性 AI列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病。近期的 AIV 主动监测显示，阳性样品主要来自活禽交易市场。为有效研判湖南省永州市 AI流行态势，进一步制定具有针对性的防控措施，2017 年 4—12 月对该市禽类调运频繁的冷水滩黄泥井活禽交易市场、零陵虎子岭禽类批发市场及部分城乡农贸市场进行了 AIV 污染状况调查。

1　材料与方法

1.1 样本采集

起初样品采集点设在冷水滩区黄泥井活禽交易市场，每月采集 5 个摊位 50 份家禽拭子（3 个水禽摊位、2 个鸡摊位）、10 份环境拭子（包括笼具、食物、饮水、污水等，每个摊位 2 份）；后续扩大了样品采集范围，在部分城乡农贸市场及零陵虎子岭禽类批发市场也开展了调查。

1.2　主要试剂及仪器

核酸提取试剂盒（磁珠法）：购自杭州艾康生物技术有限公司；禽流感病毒 H5/H7 亚型实时荧光 RT-PCR 检测试剂盒：购自中山大学达安基因股份有限公司。其他仪器：ABI7500 实时荧光 PCR仪；杭州艾康生物科技生产的核酸提取仪。

1.3　检测方法

按禽流感病毒 H5/H7 亚型实时荧光 RT-PCR检测试剂盒说明书进行病原检测。从采集的样本中提取病毒 RNA 后，以实时荧光定量反转录 - 聚合酶链反应法（real time RT-PCR）检测 H5、H7 亚型核酸；CT 值 <38 判定为阳性。

1.4　数据分析

将有关数据录入 Excel 2003 软件进行整理，分析不同动物种类、时间、场所、来源地及环境样品中的阳性率是否存在差异，并使用 GraphPad Prism5 软件制图。

2　结果

2.1　总体情况

2017 年 4—12 月，每月在市场采集样品进行H5/H7 亚型 AIV 检测，共采集 49 个摊位（次）的571 份样品。其中，在 9 摊位（次）44 份样品中检出 H5 亚型 AIV 核酸阳性，阳性检出率为7.7%，未检出 H7 亚型 AIV 核酸阳性样品（表 1）。

2.2 时间分布

除 5 月份未检出阳性样品外，其余月份都检出了 H5 亚型 AIV 核酸阳性样品，且临近冬季，阳性检出率明显上升（图 1）。另外，检出阳性的禽类均在摊位停留 2 d 以上。

图1　阳性率时间分布

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