广州市活禽批发市场活禽流感感染风险因素调查

2003 年 12 月暴发的 H5N1 禽流感疫情和 2013年发生的人 H7N9 流感事件，给全球养禽业和公共卫生带来极大影响。2017 年出现的对鸡具有高致病性的 H7N9 流感变异株，引起了养禽业的极大关注。2017 年 7 月 7 日，我国统一采用重组禽流感病毒（H5+H7）二价灭活疫苗（H5N1 Re-8 株 +H7N9Re-1 株）对家禽实施免疫。研究发现，活禽市场作为流感病毒的一个重要储存库，不同种属、不同产地的禽类集中在一起，为流感病毒基因重组和跨种传播提供了良好条件。因此，活禽交易市场被认为是人感染 H5N1、H7N9 等流感病毒的高风险区域。为降低人感染流感风险，广东省于 2014年要求活禽交易市场须实行“一日一清洁消毒、一周一大扫除、一月一休市、过夜零存栏”制度，即“1110”制度。该制度的实施有效降低了流感病毒阳性检出率，但其依旧处于较高水平。本研究在活禽批发市场正常执行“1110”制度前提下，通过分析所采活禽样品的流感病原分布，探究活禽批发市场活禽感染流感病毒的可能风险因素，以期为政府调整流感防控政策提供依据。

1　材料与方法

1.1 时间和对象

2017 年 4 月，选择广州市黄埔区家禽批发市场（A）和花都区家禽批发市场（B）为调查对象。

1.2　抽样策略与样本量计算

1.2.1　群体水平　用 Win Epi 软件，设预期场间流行率为 40%，置信水平为 90%，可接受误差为10%，计算至少需采集的运输车辆和活禽经营档口数量。

1.2.2　个体水平　用发现疫病的抽样策略抽取个体。假设群大小 3 000 只，置信水平 95%，试验敏感性 90%、特异性 99%，场内预期流行率 20%，得出每部运输车辆和每个活禽经营档口各抽取 15只活禽样品。对所有样品标明样品种类（如鸡、鸭、鹅等）并进行唯一性编号。

1.3　采样时间

每个家禽批发市场采集 2 次：第 1 次采集运输车辆中的活禽样品，并记录活禽去向的档口编号；第 2 次采集 24 h 后已记录档口的活禽样品。

1.4　问卷调查

问卷设计尽可能考虑到与流感传播有关的所有风险因素，包括市场外周环境卫生状况、运输车辆和档口消毒频次、活禽种类、活禽来源地、活禽在途运输时长等 13 个风险因素。进场前对活禽运输车辆司机，进场后对活禽经营档口工作人员进行问询调查，并辅以《动物检疫合格证明》等资料佐证。所有问卷均由调查人员填写。

1.5　样品采集和保存

严格按照《动物疫病实验室检验采样方法》（NY/T 541—2016）的要求采集并保存样品，送广州市动物疫病预防控制中心实验室检测。

1.6 实验室检测

采用通用型流感病毒荧光 RT-PCR 方法。

1.7 风险因素分析

用 Epi InfoTM7 软件进行单因素分析；保留P<0.05 的风险因素，用 IBM SPSS 22 统计软件进行 Spearman 相关性分析，结合生物学知识剔除相关系数大于 0.4 的因素；用 Epi InfoTM7 对保留的风险因子进行多因素 Logistic 回归分析，得到回归模型；用 IBM SPSS 22 做 Hosmer-Lemeshow 检验和 ROC 曲线评估模型拟合优度。

2　结果

2.1 总体情况

在 A 批发市场随机采集 15 部车辆和 30 个活禽经营档口的样品（每天约有 20 部运输活禽车辆进入，共有 55 个活禽经营档口）；在 B 批发市场随机采集 7 部车辆和 14 个活禽经营档口的样品（每天约有 7 部运输活禽车辆进入，共有 18 个活禽经营档口）。共采集活禽样品 990 份。其中，运输车辆活禽样品 330 份，经营档口活禽样品 660 份；A批发市场 675 份，B 批发市场 315 份。检出通用型流感病毒阳性 435 份，样品阳性率为 43.94%。

2.2 不同市场对比

A、B 两个批发市场活禽样品流感病毒阳性率分别为 51.85% 和 26.98%，具有统计学差异（χ2=52.91，P ＜ 0.05）。

2.3 进场前后对比

进场前后的样品流感病毒阳性率分别为24.24% 和 53.79%，具有统计学差异（χ2=77.96，P＜ 0.001）。

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