(1)ELSIA的适用范围 ① 稳定场的免疫程序评价 如首免日龄的确定,通过抗体检测可确定母源抗体是否存在干扰及最佳的免疫日龄(本质上疫苗也是弱毒,会消耗母源抗体,如母源抗体过高将完全中和疫苗毒,则不仅未产生免疫反而降低了母源抗体保护)。 ② 检测疾病的感染率 仅适用于未做某种疫苗的疾病的感染状态评估(伪狂犬除外)。如猪场未做蓝耳疫苗免疫,可通过检测不同日龄段的仔猪的蓝耳抗体阳性率,确定猪场是否存在蓝耳病毒的水平传播。 ③ 不稳定场通过检测抗体判断是否发病 是可以通过离散度和抗体滴度判定的,但这需要较多的实践经验和针对本场的大量的样本分析,一般花费极高。由于病原感染和疫苗免疫均可以产生抗体,因此当疫情来临时,通过ELISA不能判定哪些抗体是疫苗产生的,哪些是病原产生的,因此必需结合病原检测(PCR)结果才能确诊。在此声明不推崇通过ELISA检测的数值高低就判断猪群是否爆发疾病,特别是样本数量较少时随机性太大。 (2)ELISA检测的误区和建议 ① 抗体检测需要足够的样本数 一般母猪群样本数至少10%,才能反映总体的情况,样本数过少,随机性太大,容易误读。 ② 样本应具有代表性,采样应参照免疫程序 如伪狂犬采样,可按照母猪胎次及仔猪日龄段采样,采样的仔猪日龄应参考猪场的免疫程序及疫苗免疫持续期规律,通过对这些数据的分析能判断猪场是否存在病毒的水平或垂直传播,及感染的起始时间,这些数据对免疫程序调整非常具有价值。 ③ 周期性的抗体检测数据更有价值 抗体检测应具有周期性,最好每季度检测一次。通过对比近期数据与前几年同时期的数据,对于猪场的科学决策具有参考价值。 2、聚合酶链式反应(PCR或RT-PCR)及基因序列测定 PCR检测针对的是病原,更具有针对性,是确诊的重要依据。基因测序可确定猪场内病毒流行情况(毒株种类和比例),基因测序的前提是进行PCR检测。但PCR操作有难度,对人员素质和实验条件要求高,此外有时需采用多种方法确诊,因此做PCR必需还有责任心,大型规模化场从数据真实准确的角度上考虑也需要考虑配置,如不能配置也需要有可靠的合作单位。 (1)优点:针对性强、可确诊;可区分野毒与疫苗毒;q-PCR可确定病毒载量,确定发病的主因。 缺点:操作复杂,需专业人员操作;要求较高,专业人员需要有深厚的分子生物学基础,了解病原的基因结构,此外还需要有方法的支持(针对不同病原,不同基因型的多套可靠的引物序列)。 (2)PCR及测序适用范围 ① 疾病诊断,确定多种病原,适用于分析发病的主因。 ② 通过测序可确定病原基因型,便于对症用苗;对蓝耳的免疫尤为重要(不同毒株的蓝耳交叉保护力差)。 (3)注意事项 ① 不稳定场首先应考虑采用PCR检测病料。 ② PCR检测应保证病料的新鲜,路途较远时需冷冻后送检。 ③ 检测时避免污染,实验室中应有相应的设施确保不出现气溶胶污染。 (4)重点病料 ① 脐带血:脐带血检测用于分析母猪流产原因(脐带血还可用于检测是否为霉菌毒素或药残引起的流产)。 ② 胎衣及死胎:用于分离病原或检测流产原因。
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