彭晓玲1，兰 玲1，马亚珍1，成 进2
（1．新疆自治区动物卫生监督所，新疆乌鲁木齐830063；
2．新疆自治区畜牧科学院，新疆乌鲁木齐830000） 摘要：参照国内外方法，选择M基因的保守序列作为靶序列，应用快速、高效、特异的一步法RT-PCR检测法进行禽流感病毒型特异性诊断，得到大小为229bp的特异性产物，与预期结果一致。另外，采用柱式总RNA提取方法，与酚／氯仿的抽提方法相比，具有快速，对操作人员技术要求较低，整个反应和扩增体系设计合理等特点。以上技术，简化了操作程序，节约了检测时间，缩小了因微量操作引起的误差，可获得较理想的结果和可靠的检测数据。
关键词：禽流感病毒；RT-PCR；一步法
高致病性禽流感因其传播快、危害大，被世界动物卫生组织（OIE）列为A类动物疫病，我国将其列为一类动物疫病［1］。禽流感单靠临床症状常常难以确诊，实验室诊断是确诊流感的惟一有效途径。随着分子生物学技术的飞速发展，禽流感病毒分子生物学检测方法不断取得新的进展［2］。RT-PCR检测方法是近几年发展起来的一种分子生物学基因诊断技术，用RT-PCR技术对禽流感进行诊断，可以大大缩短病毒分离和鉴定的试验周期。它可通过基因序列和结构分析，从分子和基因水平直接对临床病料或鸡胚培养物进行禽流感病毒（AIV）型、亚型及不同毒力株的检测［3］，目前已经大量用于流感等病毒的检测工作中。用一步扩增法可检测出总RNA中小于1ng的低丰度mRNA，为RNA病毒检测提供了特异性强、敏感性高的方法，并为获得与扩增特定RNA 互补的cDNA 提供了一条有效的途径［4 6］。
禽流感病毒基因组由8个分节段的单股负链RNA组成［7］，M 蛋白是流感病毒的主要结构蛋白，占病毒蛋白总量的40%，具有型特异性，其抗原性的差异是流感病毒分型的依据之一。除了维持病毒粒子的形态外，M1还能调节病毒转录酶的活性［8］。本研究选择禽流感病毒M 基因的保守序列作靶序列，应用RT-PCR技术，合成cDNA，从基因水平检测病毒的RNA，进行禽流感病毒型特异性诊断，以期建立高致病性禽流感快速诊断方法。 完整文章阅读点击下载（PDF格式）
|
