高致病性禽流感新城疫免疫抗体检测试验中,由于实验结果的判定直接依赖红细胞的凝胶状况,因此,配备红细胞悬液是这项试验的重要环节,在几年的操作过程中我们总结了以下几点体会。 1、鸡的选择 试验要求为SPF鸡,如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的成年健康公鸡。 2 、采血前的准备 采血前鸡必须足够饮水,否则血液特别黏稠而导致采血过程中易发生凝结现象。在采血过程中,用小号针头的注射器吸取阿氏液1ml,取至少3只SPF鸡,采血约2-41ml,与阿氏液混合,放入装10 ml阿氏液的离心管中混匀,采血速度必须快,以防发生凝结。 3、 采血 环境对血液有很大程度的影响,采血一般选在比较凉爽的环境下进行。环境温度太高,或阳光直射则在采集过程中血液易发生凝固。鸡采血一般选在翅根部的静脉,此处的血管比较粗明显,易于刺入,采血流畅,成功率高。采集完毕后将血液和阿氏液轻轻混匀慢慢推入PBS液中以备用。 4、1﹪鸡红细胞悬液的配备 采集至少3只鸡的血液置于离心管内混合,用PH7.2的PBS 液连续洗涤3次。用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,待最后一次完成后弃去上清液,用移液器吸取1ml红细胞加入到99ml的PBS液中,便可制得1﹪鸡红细胞悬液,4℃保存不宜超过3天使用。 5、体会 在配制红细胞悬液的过程中,尽可能避免血液凝结和红细胞破裂现象发生。常规下,悬液在静止后沉于瓶底,上清液透明,若轻轻摇动则红细胞似沙粒。如有团状和血丝状现象存在,则悬浮液不能使用。
|