猪瘟( Classical Swine Fever,CSF)是猪瘟病毒(CSFV)引起的一种猪的急性、烈性、接触性传染病,属国际重点检疫动物疫病之一,我国将此病列为一类动物疫病。1956年周泰冲等研制成功的中国系(C系)猪瘟兔化弱毒疫苗是我国一直使用的唯一疫苗株日。而该疫苗是国际公认的最佳疫苗,很多欧亚国家采用了C系弱毒苗有效地控制了猪瘟流行,因此免疫接种仍是防治猪瘟的主要措施,目前我国主要通过接种猪瘟兔化弱毒疫苗来控制猪瘟,这种以防为主的防制方针,大大降低了猪瘟的感染率和发病率。但近年来随着养殖业的发展,养猪规模的增加和养殖技术水平的提高,该病又有严重发生或流行的迹象。许多猪场较合理的使用了猪瘟疫苗,但是由于免疫失败,猪瘟还是呈散发性流行,病程由急性变为慢性,出现持续性感染、胎盘感染、新生仔猪先天性感染,表现为死亡、免耐受或无明显症状的带毒猪。 母猪持续感染和仔猪胎盘感染是目前引起猪瘟免疫失败的最重要原因。国家猪瘟参考实验室首次成功地利用猪瘟野毒人工复制了猪瘟病毒持续感染的带毒母猪动物模型,证实了这种母猪带毒时间可持续750d,甚至终生带毒、排毒。这些母猪产下的仔猪多为先天免疫耐受猪,经胎盘感染出生后存活的仔猪往往成为持续感染者,不断向外界环境排毒,而本身并不表现任何临床症状,导致猪瘟在猪场中形成反复恶性循环,即猪瘟亚临床感染一胎盘感染一母猪繁殖障碍一仔猪带毒一后备母猪一亚临床感染,使得带毒猪在临床中有3%~33%的带毒率。研究还显示低水平的母源抗体不能抵抗猪瘟野毒感染,因此及时监测母源抗体滴度,结合群体抗体水平制定适合猪场的猪瘟免疫程序具有重要的意义。 当前,防止猪瘟恶性循环的核心是保证后备猪群和种猪群(包括种公猪)猪瘟抗体合格,培育出健康、合格的仔猪。本研究为了评价母猪胎次对猪瘟疫苗免疫敖果的影响,我们选取了一个大型规模化猪场,对种用母猪逐头采血,分离血清,用IDEXXELISA猪瘟抗体检测试剂盒进行测定,结合检测结果对所检猪场猪瘟抗体不合格的种猪重新接种猪瘟疫苗,4周后再检测其猪瘟抗体,观察母猪胎次对猪瘟抗体合格率的影响。 1 材料与方法 1.1 血清来源与份数 采集福建省大型规模化猪场全部种用母猪(经产母猪和后备母猪)1290头,进行耳静脉采血,按常规方法分离血清,最后再用IDEXX ELISA猪瘟抗体试剂盒检测猪瘟抗体:随后对猪场猪瘟抗体不合格的350头种猪进行加强免疫猪瘟疫苗,28—30d后再次检测猪瘟抗体。血清按常规方法分离血清,并及时进行检测,检测后置-20℃冰箱保存。 1.2 试剂与仪器 HerdChek猪瘟抗体检测试剂盒(CSFV Ab),批号:99-43220,有效期:2010年12月31日,北京爱德士元亨生物科技有限公司提供:德国Eppendorf移液器;ExL800酶标仪和ExL50洗板机,美国宝特公司提供;恒温箱水浴锅;离心机等。 1.3 操作步骤与判定标准 首先将待检血清和猪瘟抗体检测试剂盒恢复到室温(18—25℃),将待检血清用样品稀释液作1:2倍稀释后加入到ELISA板内,然后按照产品说明书要求进行孵育和操作。试验中设2孔阴性血清和2孔阳性血清对照,只有阴性对照的平均OD450>0.50,阳性对照的阻断率;50%,该检测结果才能有效:试验过程中严格按照试剂盒说明书进行操作,当种猪猪瘟抗体阻断率≥50%时,猪瘟抗体检测结果为合格,具有一定的猪瘟病毒抵抗力,判定结果详见表1。参照杜希珍等日对假定猪瘟阴性场和阳性场的检测结果,认为猪瘟稳定场的猪瘟抗体合格率达90%以上,变异系数在25%以内时,无猪瘟的困扰,生产业绩也比较好,而对假定猪瘟阳性场一般认为猪猪瘟抗体合格率达到70%以上,变异系数在40%以下也基本处于稳定状态。
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