免疫奶牛群布鲁氏菌病的实验室诊断

        260份血清样本琥红平板凝集试验检出阳性28头，阳性率为10.77%，其中强阳性12头（++++）；对28份平板凝集阳性样本进行试管凝集试验，检出阳性5头；用抗体竞争ELISA检测184份（包括所有平板凝集阳性样本），检出阳性5头份（3种方法检测阳性牛符合情况见表2）。
        RBT与c-ELISA检测结果比较，灵敏度为100%（5/5），特异性为87.15%（156/179），符合率为87.50%（161/184）；SAT与抗体竞争c-ELISA检测结果比较，灵敏度为80.00%（4/5），特异性为95.65%（22/23），符合率为92.86%（26/28）。 

表2  3种检测方法阳性样本符合情况一览表

        （三）c-ELISA与PCR检测结果比较 2008年10月至2008年12月，我市某奶牛养殖场连续出现奶牛流产现象，截止我们接到报告和诊断期间共流产63头份，流行病学调查显示，该场存栏奶牛780头，其中4月龄以上奶牛722头，已用S2号布病疫苗免疫2次，最后一次免疫距今8个月以上。采4月龄以上奶牛血清样本722头份，抗体竞争ELISA法检出阳性牛60头，阳性率为8.31%；与临床流产病例比较，阳性牛中有25头发生流产，采上述60头阳性牛抗凝血进行PCR检测全部为阴性，间隔30天重复检测一次，仍然全部为阴性。采集17头份流产奶牛羊水进行PCR检测，检出阳性7头份，与抗体竞争ELISA法检测结果比较均相吻合。
        三、小结与讨论
        王海霞（2008）等对检测奶牛布鲁氏菌病试验方法进行了比较，结果表明虎红平板凝集试验与试管凝集试验阳性符合率较好，虎红平板凝集试验检测为阳性的，试管凝集试验检测均为阳性。但我们的检测结果表明，虎红平板凝集试验与试管凝集试验阳性符合率较差，28份平板凝集阳性样本进行试管凝集试验，结果检出阳性只有5头，这与我们检测的是免疫牛群有直接关系。
        对免疫奶牛群布病抗体阳转率调查表明，布病疫苗免疫后前3个月平板凝集试验抗体消减速度较快，此后消减速度减缓，免疫后至少半年内免疫抗体基本消失。而那森等(1996)用S2苗给0～8月龄的犊牛结膜接种0.05 ml(10亿个活菌)，接种后15 d开始产生抗体(37%)，90 d达到高峰，120 d后抗体全部消失；胥元鹏(2001)给4～8月龄牦牛按25亿活菌/头剂量免疫，安全可靠，免疫阳转率达93.8%，对抗体消长情况检测,免疫抗体在免疫后9个月内消失，不影响进入成年期后对布病的定期检疫。我们的研究结果介于二者之间，为6个月，所以我们认为琥红平板凝集试验仍然适用于布病免疫牛群的初步筛选诊断，尤其是免疫期超过6个月以上的奶牛。
        范伟兴（2006）等通过用RBT、SAT和cELISA对未经疫苗免疫而发生布病感染的牛群血清检测结果的对比得出了RBT和SAT与cELISA检测的一致率较高(85%以上)，与我们的结果比较一致（87.5%和92.86%），但我们使用的是免疫牛群的血清。在免疫牛群方面，他们没有用RBT、SAT和cELISA结果进行比较，而采用了SAT和iELISA进行比较，结果表明，214份血清样品中，iELISA检测结果与SAT有23份不符，其中14份iELISA阳性，SAT阴性，9份iELISA阴性,SAT阳性。我们研究结果显示，与布病抗体竞争ELISA检测方法比较，试管凝集试验对免疫期超过1年的奶牛仍有95.65%的特异性，由于其操作简便，尤其适于基层兽医实验室使用。
        对60头阳性牛抗凝血进行PCR检测全部为阴性，间隔30 d重复检测，仍然全部为阴性的结果表明，PCR方法敏感性太差,尚不能应用于布病的临床诊断。王丽（2004）等研究结果与我们的结论相符合。虽然张辉（2008）等、杨莲茹（2007）等 建立了布鲁氏菌病病原快速诊断方法——PCR方法，但该方法也只适用于布鲁氏菌感染的早期的乳样样品病原学检测，血清样品敏感性依然较差。
        瑞典SVANOVIR公司生产的布病抗体竞争ELISA试剂检出结果与PCR临床病料检出结果符合率为100%，表明该试剂除可用于19菌株疫苗免疫6个月以上的鉴别诊断，也适用于猪型2号布病疫苗（S2）免疫6个月以上奶牛的鉴别诊断。
        本次研究同时发现，发生流产的奶牛养殖场牛病毒性腹泻的阳性率高达90%，该病和布病可能是造成奶牛流产的主要病因。

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