(三)细菌的分离、培养和鉴定
猪的细菌性疾病种类很多,危害不小,常见的细菌病有仔猪黄痢、白痢、猪水肿病、副伤寒、猪丹毒、猪肺疫、链球菌病等,其中有的疾病可以一目了然(如仔猪黄痢、白痢等),易于诊断,有些疾病则一时难以确诊(如副伤寒、猪接触传染性胸膜 肺炎等),而更多的细菌病是并发或继发感染的,为了做到及时、正确地诊断猪病,规模化的猪场有必要开展细菌的分离、培养和鉴定工作,同时还可将分离出的细菌,通过抑菌试验筛选出敏感性强、疗效好的抗菌药物进行治疗。掌握了细菌学的检查技术,还可开展对猪舍消毒效果的测定,饮用水、饲料中的细菌学检查等项工作。
规模化猪场的化验室开展这项工作,需要一定的设备和条件,操作人员应该具备兽医微生物学的基本知识和实验室的操作技术、要求做到正确、熟练,其内容包括病料的采集,细菌的分离培养,形态观察,生化试验和动物接种试验等。
下面以猪肺疫的病原-多杀性巴氏杆菌的分离、培养和鉴定为例,作简要介绍。
1.采样与病原分离
猪肺疫病原为多杀性巴氏杆菌,临诊上可分为3型：最急性型,见于流行初期,常无明显的症状而突然死亡；急性型,较为常见,多呈急性胸膜肺炎症状,病程 3－5天；慢性型主要表现为慢性肺炎的症状。
(1)病料的采取 生前采取血液、水肿液，死后无菌操作采取心血、肝、脾、淋巴结、骨髓或肺部病灶等。
(2)病料的处理 脏器或淋巴结应先作表面除杂，将组织块浸渍于95%酒精中立即取出，引火自燃,这样反复2－3 次,或在沸水中浸烫数秒钟,然后用灭菌刀剖切，其剖面在血琼脂平板一侧涂抹,面积是平板的1/5。再用铅耳在涂层上划抹分离,分离时应涂抹数个平板,以提高检出机会。
(3)直接镜检 血液作推片,其他脏器以剖面作涂片各若干片,用数片以甲醇固定作革兰氏染色,另数片作瑞氏或美蓝染色。如发现大量革兰氏阴性、两端钝圆、中央微凸的短小杆菌,即可初步确诊。本菌无鞭毛,不能运动,能形成荚膜。单染菌体呈卵圆形,两端着色深,中央着色浅,好像两个并列的球菌,故有两极杆菌之称。病料用印度墨汁染料染色,可清晰地见到细菌的荚膜。
(4)分离培养 最好用麦康凯琼脂和鲜血琼脂平板同时进行分离培养,本菌在麦康凯琼脂上不生长,而在鲜血琼脂平板上,培养24小时后,可长成淡灰白色、圆形、湿润、不溶血的露珠样小菌落。涂片染色镜检,为革兰氏阴性小杆菌,再进一步可作生化和动物接种试验。
2.病原的鉴定
(1)生化反应 本菌在48小时内可分解葡萄糖、果糖、单奶糖、庶糖和甘露醇等,产酸不产气，一般对乳糖、鼠李糖、菊糖、水杨苷和肌醇等不发酵。可产生硫化氢和氨,能形成被基质,甲基红(MR)试验和维培二氏(V-P)试验均为阴性。接触酶和氧化酶均为阳性。石蕊牛乳无变化,不液化明胶。
(2)动物接种试验 取病料在灭菌研钵中加生理盐水 1：10制成乳剂,如作纯培养的毒力鉴定,用4%血清肉汤24 小时培养液或取血平板上菌落制成生理盐水菌液,皮下或腹腔接种小白鼠2－4只,每只注射0.2毫升,一般经10个小时左右致死。死亡小白鼠的呼吸道及消化道粘膜有出血小点,肝肿大、有坏死灶。取心血及肝脏涂片染色镜检,见大量两极浓染的细菌,即可确诊。
(3)血清型鉴定 多杀性巴氏杆菌可分为多种血清型。目前国际上公认的分型方法是将特异性荚膜抗原吸附于红细胞上,作被动血凝试验,将本菌分为A,B,D,E 4个血清群,又将菌体抗原作凝集反应,将本菌分为12个血清型,用阿拉伯数字表示。猪巴氏杆菌的血清型以5：A和6： B为主。
|
