时间：2009-12-12 点击： 次 来源：阳光畜牧网 作者：阳光畜牧网 - 小 + 大
| 禽流感对养禽业的危害十分严重，疫苗免疫是目前预防和控制禽流发生的最有效途径，免疫后抗体水平的高低直接关系到实际的免疫效果，现主要借助于抗体监测来了解或考核免疫效果。因而，免疫机体监测的准确性、有效性、可靠性、代表性等对禽流感防控工作起着非常关键的作用。笔者根据自身的工作经验认为以下几个问题在禽流感免疫监测中值得注意。 一 采样及送检 样品的采集应采用随机的方法以减少人为的主观因素对最后结果产生影响，保证采样及送检过程中样品的质量，免受各种污染。样品数量应满足统计学的要求。对于血清样品，一般要求能够采集到无溶血、无污染的血清样品。所采样品应置于保温容器中送检，送检过程中，应防止冰壶剧烈震动，发生溶血。 二 血清的制备 最好采用不溶血的血清，但在实际工作中，溶血现象很常见，在采集血清的过程中，要尽力减少溶血现象，采出血液后马上离心析出或放置斜面静止自然析出，这样能减少血清溶血，保证化验结果的准确。 三 PBS液的制备 药品里会有一些杂质，特别是开封时间长的药品，配制好的PBS必须经过过滤和消毒后才再使用。PBS液的PH值最好为7，此时红细胞的沉淀最充分，PH值偏酸达到了细菌蛋白的等电点，即在无相应抗体存在情况下，细菌也能发生凝集现象；PH值在7.8以上时凝集的红细胞洗脱加快。 四 红细胞悬液的制备 按照实验要求，血凝试验必须使用未免疫鸡的红细胞，但是在实际工作中，基本都是用免疫鸡的红细胞，因此只能是对这样的红细胞进行多次洗涤，尽量减少对试验结果的影响；同时不同鸡的红细胞对禽流感病毒的敏感性不同，所以实验时最好用3～4只鸡的混合红细胞。此外，红细胞浓度也应确定，如红细胞浓度偏低，血凝试验结果则会偏高。 五 4单位病毒的配制 抗原的效价一定得标定正确，每次监测之前一定先准确测定抗原的效价同时测2～3遍取其平均值，然后根据其准确效价配制所需4单位病毒液，再经HA试验检测其准确性。如制备的4单位病毒抗原效价偏低，不足以凝集红细胞，会导致HA结果偏高，反之则会偏低。 六 96孔V型板 使用时间较长的96孔V型板，不易清洗干净，或用硬物清底，在板孔里划出很多痕迹，都会影响红细胞的沉淀，即使是用一次性板，板的质量对实验效果也有影响。 七 操作过程 加样时，各种成分一定要掌握准确的剂量，移液器是定量的，但易受操作者手用力的影响，因而在移液时应注意用力适度。另外还要注意在取样时每次取样吸头中不得含有气泡，如果有气泡存在会占有体积，取样量会因此而不准确，而造成检测结果的误差。 操作时加入抗原和抗体后要在微量振荡器上进行一次震荡（1分钟），让其作用后再加入红细胞，进行第二次震荡（1分钟），两次震荡的目的是使各样品充分混匀，达到充分作用的效果。然后放在20～30℃温箱内或室温下作用，等候观察结果。此时不要频繁的移动它，否则会影响结果。 当室温过高时配制的各种试液应及时放置于4℃冰箱中保存，使用时再取出来。另外由于反应速度加快，因此判定的结果也要相应提前。不可在接近解凝时才判定，否则测出的HI抗体水平会升高。当冬季温低时可延长HA和HI的反应时间，或者把反应扳置37℃培养箱中，可解决温度过低造成的影响。 八 结果分析 不同厂家生产的疫苗、不同免疫程序、不同的鸡群、免疫后的结果都会不同，通过检测的结果，准确掌握鸡群的免疫抗体水平，从而科学的指导防疫，对家禽业的生产有着非常重要的意义。 |
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