鸡传染性喉气管炎研究进展

（二）血清学诊断 目前关于传染性喉气管炎病毒的检测方法有病毒中和试验、琼脂扩散实验、荧光抗体试验和酶联免疫吸附试验。几种方法比较而言ELISA方法具有快速、敏感、特异等特点。York and Fahey等将单克隆抗体应用到检查ILTV的ELISA方法中，结果表明，此方法比病毒中和试验快速、准确；与病毒分离方法一样准确，但较病毒分离方法快速；比荧光抗体方法准确，比简便的琼脂扩散试验准确和快速。此方法能清楚的区分ILTV感染与非感染鸡，也能与其它呼吸道病原区分开来。由于许多ELISA试验需要高度纯的抗原用于包被反应板，而ILTV在细胞培养中的滴度低，且是细胞结合毒，因此生产大量的高纯度的ILTV抗原是非常困难的。Bauer等通过用两个ELISA商品化的试剂盒检测ILTV抗体与血清中和试验相比，进一步证明此方法检测ILTV血清抗体与血清中和试验方法一样敏感。

（三）分子病毒学诊断 上述的诊断方法都可以对传染性喉气管炎病毒做出诊断，但都存在不足之处，随着分子生物学技术的迅速发展，DNA酶切图谱分析技术、PCR技术和分子杂交技术使ILTV的诊断更加准确、方便和快捷。DNA酶切图谱已被用作区分几种α-疱疹病毒，并表现了相当的稳定性。Kotiw等首先利用酶切图谱区分不同毒力的澳大利亚毒株。大多数分离株在基因上是同源的，但仍存在微小差别。但是酶的选择及种类等限制了酶切图谱在流行病学研究中的作用，需要另外一些技术来弥补酶切图谱的不足；分子杂交技术的应用使ILTV不同毒力的鉴别，以及与其他禽病毒的区分成为可能。杂交试验表明，高、低毒力的ILTV DNA间的同源性大于96%，这一技术不仅为鉴定ILTV提供了安全有效的手段，而且能快速、简便地检出潜伏感染的ILTV；核酸探针是利用核酸杂交的原理，先通过限制性内切酶消化或PCR的方法获得ILTV核酸的一个特异片段，然后用标记物进行标记，即成探针。已有报道称制备了地高辛标记的核酸探针，并能检出0.01Pg的核酸；PCR方法是利用人工设计合成的一对引物对样品中ILTV核酸上的某一特定片段进行体外扩增。与传统实验诊断方法进行比较，PCR方法能敏感地检期感染和潜伏感染，而且对细菌污染的原始病料同样敏感，这是细胞培养分离病毒很难办到的。目前已有多篇文献报道建立了该疾病的PCR检测方法。

六、防制

    目前ILT的防控除采取严格的隔离、消毒等综合性防控措施外，疫苗免疫接种仍然是预防和控制ILT的主要措施。尽管灭活疫苗比较安全且已在生产中应用，但通常用于控制ILT的疫苗仍然是活病毒疫苗，国际兽疫局对ILTV疫苗作出了一定的要求：即ILTV疫苗毒株的毒力应符合标准，低毒力的疫苗株免疫效果可能不理想，而高毒力的疫苗株常常会引起严重的不良反应。国内外目前用于防控ILTV的疫苗以弱毒活疫苗的应用最为广泛，但用传统的方法很难从根本上解决ILT的暴发与流行，这就急需研制安全、高效的新型疫苗以达到防控ILT的目的。随着分子生物学技术的发展和日趋完善，利用基因工程疫苗来预防IL已经成为人们的共识，但也有不足之处。因此必须从多方面考虑采取合适的疫苗免疫措施。认为在不同的场合选择不同的疫苗免疫，有可能实现根除ILT的目标。具体而言，对种鸡使用ILTV DNA疫苗（初免）及活载体疫苗如表达ILTV gB基因重组鸡痘病毒（加强免疫），对商品鸡而言，疫区以ILTV TK基因缺失疫苗为主，配合使用活载体疫苗，并逐渐过渡到以活载体疫苗为主，而在非疫区则以活载体疫苗为主。根据ILTV本身的生物学特性，必须使用标记疫苗结合血清学方法来区别疫苗接种鸡和自然感染鸡，才能彻底根除乃至消灭ILT。