2018年海南省猪A型塞尼卡病毒血清流行病学调查
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摘要：为了解海南省A型塞尼卡病毒(Senecavirus A, SVA)感染状况，应用间接ELISA方法，对从海南省巧个市(县)112个场点采集的2 547份猪血清样品进行SVA抗体检测。结果显示：SVA血清样品抗体阳性率为10.9%，场点阳性率为50.0%；15个市(县)的场点阳性率在14.3%—100%之间，其中有6个超过50%; 15个市(县)的样品阳性率在1.0%—31.7%之间，大邵分市(县)小于10%；规模化养殖场场点阳性率(61.2%)高于散养户(<33.3%);仔猪、母猪、后备猪、公猪、育肥猪样品阳性率分别是20.5%、15.5%、13.5%、10.7%、 5.9%。结果表明:SVA已扩散至整个海南省，防控形势较严峻，需制定相应防控措施；交通枢纽地区和规模化养殖场的SVA流行面较广，仔猪和种猪群中的S VA流行率较高，应重点加强监测和相关流行病学研究。本研究摸清了海南省猪群中的SVA的感染与分布情况，找出了重点防控区域和防控对象，对于指导该地区SVA防控具有参考意义。 关键词：A型塞尼卡病毒；猪；血清学调查；间接ELISA；抗体检测 A型塞尼卡病毒(Senecavirus, SVA)也称塞尼卡谷病毒(Seneca Valley virus, SVV)，属于RNA病毒科塞尼卡病毒属，于2002年在美国被首次分离到。2007年，美国从加拿大进口的187头猪出现水疤病症状，发病率高达80%，最终确诊为SVA感染。2014年以来，全球多个国家确诊发生猪S VA感染。2015年9月以来，美国中西部多个地区的猪群发生水泡性疫情，新生仔猪病死率达30%—70%，最终确诊为SVA感染。现已证实，猪SVA感染能够引起原发性水泡病，导致猪鼻吻、蹄部冠状带的水泡病变，同时伴有踱行、厌食、嗜睡和发烧等临床表现。2015年，我国广东省发现了由SVA感染导致的猪水泡性疾病，2017年我国福建省和河南省再次发生猪S VA感染案例。近两年，猪SVA感染在全球多地出现，并已传入我国。为了解海南省猪群中的SVA感染和分布情况，2018年采集海南省15个市(县)的猪血清样品，使用间接ELISA方法进行SVA抗体检测，以期为海南省的SVA防控提供参考。 1 材料与方法 1.1 样品采集 2018年5-7月，从海南省15个市(县)中，随机选取112个规模场和散养户作为采样点，根据各场点实际存栏量，按照10%—50%的采样率，共采集2547份猪血清样品，-20°C保存或4°C备用。 1.2 试剂 SVA间接ELISA抗体检测试剂盒，由中国农业科学院兰州兽医研究所提供。 1.3 主要仪器 离心机、微量加样器，购自德国Eppendorf公司；iMARK型酶标仪、自动洗板机，购自美国BIO-RAD公司。 1.4 检测方法 严格按照SVA间接ELISA抗体检测试剂盒说明书进行操作:统计样品数量，确定所需SVA抗原包被ELISA板(条)数量;阳性对照、阴性对照分别测量2孔，待测样品测1孔;在抗原包被ELISA板中，加入50 uL 30倍稀释的待检血清，以及未稀释的阴、阳性对照血清各50uL，充分振荡混匀，在3 7°C恒温箱孵育30 min;用PBST洗涤5次，加入50uL兔抗猪IgG-HRP工作液，37°C恒温箱孵育30 min；再用PBST洗涤5次，拍干；每孔加入50uL TMB液，37°C恒温箱孵育显色(12士1) min；每孔快速加入50uL终止液，用酶标仪测定450 nm波长的吸光值（OD450）。 1.5 判断标准 OD450阴性对照平均值小于等于0.2，并且OD450阳性对照平均值—OD45O阴性对照平均值大于等于0.9，则试验结果成立。根据公式S/P =(样品OD450—阴性对照OD450平均值)/(阳性对照OD450平均值—阴性对照OD450平均值)，计算S/P值。当S/P<0.4时，判定为阴性；SlP大于等于0.4时，判定为阳性。 2 结果与分析 2.1 总体情况 在15个市(县)112个采样场点中，检出阳性场点56个，场点阳性率为50.0%;在采集的2547份猪血清样品中，检出抗体阳性278头份，样品阳性率为10.9%(表1)。总体来看，海南省猪群中的SVA流行面较广。 2.2 区域分布 检测结果(表1)显示：海南省15个市(县)的SVA抗体场点阳性率在14.3%—100%之间，其中场点阳性率小于20%的有4个市(县)，超过50%的有6个；SVA抗体样品阳性率在1.0%—31.7%之间，其中小于10%的有9个市(县)，而超过20%的有2个。从上述结果可以看出，海南省各市(县)的SVA感染情况并不均衡，存在一定的区域差异。 |