疫病监测
猪传染性胸膜肺炎血清学诊断研究进展
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5.2型特异性ELISA APP的血清分型是根据荚膜多糖（CPS）和脂多糖（LPS）抗原性的不同。对APP型的鉴定，需依靠型特异性的CPS和LPS。Nielsen等（1991）[1q利用煮沸法抽提APP2型的LPS和CPS作为包被抗原，以兔抗APP2血清作为阻断剂建立阻断ELISA，对感染APP2型养殖场的96份血清样品进行检测，阳性率达到900/0，与CFT相比具有更高的特异性和敏感性。Klausen等（2001）旧利用纯化的APP6型LPS作包被抗原，以兔抗APP6血清作为阻断剂建立阻断ELISA，特异性和敏感性分别达到97u/o和100%。Andresen等[1q用与Klausen相同的方法建立APP12 型的阻断ELISA，敏感性和特异性分别达到77%和1000'/0。APP的IPS在血清型1、9、11，3、6、8，4、7之间有相似的抗原决定簇M1，理论上利用LPS建立的ELISA检测方法在对以上血清型进行鉴定时存在交叉反应，Nielsen （1993）[17]提取APP8型的LPS建立阻断ELISA，阻断剂多克隆抗APP8的血清在使用前用3型和6型的全菌体吸附，目的在于除去3、6、8型LPS共有的抗原决定簇，避免交叉反应，试验结果也表明，此方法具有型的特异性，与3型和6型无交叉。而Klausen用同样方法建立的APP6型阻断ELISA，结果仍发现与APP3型和APP8型有交叉反应现象。在生物I型的12个血清型中，只有2、5、10、12血清型IPS具有唯一的重复寡糖结构和组成成分，理论上针对这些型的LPS建立的ELISA具有型的特异性。此外，LPS与其他非致病性的放线杆菌也存在交叉反应【，目，因此，利用LPS建立的ELISA并不能对所有血清型进行鉴定。Boss6等（1990）[，9】提取APP1型、5型、7型、2型的CPS建立ELISA血清学诊断方法，临床检验发现1、5、7型只与相应APP的抗血清呈阳性反应，而2型则与5型血清有很大的交叉反应，且与猪放线杆菌（A.s试s）感染的血清交叉反应也大，1型和5型与A.suis只有轻微的交叉反应，7型与A.suis无交叉反应。因此，1型、5型、7型的CPS -ELISA可有效用于抗体监测，而2型的CPS-ELISA因交叉反应太大，结果不确实。Inzana等（2001）闭将生物素与CPS偶联后作为包被抗原建立ELISA检测方法，1型和5型的特异性达到100%，7 型为94.50'/0，l型和7型的敏感性达到1000/0，5型为94.5%。国内外已有许多关于型特异性ELISA诊断方法的报道，但临床上APP的感染并非单一的血清型，甚至存在一头猪感染多种血清型的报道，如果选取的型特异性诊断方法与猪感染的血清型不符合，那么则会出现假阴性结果，造成误诊，若用多种血清型的血清学诊断方法对样品逐个进行排除诊断，既费时又增加检测成本。国外的Boss6等（1993）【甜]以APP1、5、7型的型特异性多糖作包被抗原建立混合ELISA，敏感性和特异性分别达到960/0和99.5 010。Hansen等（2003）阎以纯化的APP2、6、l2血清型的长链LPS建立混合ELISA，临床检测只与APP3型和8型出现交叉反应，具有很高的特异性和敏感性，并成功用于猪场的免疫监控。 6 展望 临床APP感染情况的监测，对控制APP发生具有重要意义。ApxⅣ被认为是种特异性最好的抗原，表达纯化ApxⅣ建立ELISA是检测APP并区别于其它病原的最好方法。APP血清型众多，各型间交叉反应严重，这给血清型的诊断带来很大困难。借鉴国外诊断试剂盒研发经验，根据我国APP主要流行的血清型，研制型特异性ELISA试剂盒或MIX-ELISA 试剂盒，可解决临床上大多数的APP血清型的鉴定，将有力推动我国猪传染性胸膜肺炎的诊断和防控水平。 |
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