疫病监测
猪传染性胸膜肺炎血清学诊断研究进展
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猪传染性胸膜肺炎（Porcine contagious pleuropn- eumoma，PCP）是由胸膜肺炎放线杆菌@ctinobacillus Pleuropneumoniae，APP）引起的猪呼吸系统的一种严重接触性传染病。自Pattison 1957年报道该病以来，英国、德国、瑞士、丹麦、澳大利亚、加拿大等国家均有发生，目前此病已呈世界性分布，给世界养猪业带来巨大损失[-]。随着我国养猪业集约化程度的提高，从国外引进猪种的增加，该病也随之传入我国，其发生和流行日趋严重[2】。因此对PCP进行快速、准确的诊断具有十分重大的意义，但是PCR、荧光抗体染色法等方法由于试验条件、人员能力等原因还不可能在基层广泛使用，血清学方法仍然是PCP诊断的主要手段。本文就该病目前的血清学诊断技术研究进展作一综述。 1 补体结合试验（Complement Fixation Test，CFT） CFT是用来检测APP的最早的血清学方法，它由Nicolet于1971年建立后很快成为APP分型的标准方法。Gunnarssonc3ll979年比较全细胞抗原、高压处理抗原、混合抗原和酚水抗原在CFT上的效果发现，全细胞抗原同时具有种和型的特异性，而酚水抗原型特异性最好。CFT的特异性比间接血凝试验（IHA）高，能够将副溶血性嗜血杆菌（llaemophilus parahaemoelyticus）与APP区别开；但敏感性低，而且有时会产生假阴性结果，加上操作复杂，只适合实验室应用，难以推广。 2 间接血凝试验（Indirect Hemagglntination Assay，IHA） 1983年，Mittal等[4】用盐浸、煮沸和高压处理3 种方法提取APP抗原，建立了APP的IHA用于检测和分型，发现煮沸法获取的抗原在APP1型、3型、5型的检测中具有比盐浸法提取抗原更高的特异性。APP2型与异源血清交叉反应严重，尤其是用高压处理的抗原更明显。不过它能将4型和7型分开，这是其它一些检测方法难以达到的。为克服交叉反应的问题，Blackall （1990）在应用本方法时，将待检血清按倍比稀释后，可消除大多数非特异性反应，但仍不能将APP-6和APP-8、APP-9和APP-11分开。我国逯忠新等嘲以APP超声波处理抗原和盐浸抗原致敏绵羊红细胞，建立了IHA。超声波处理抗原具有种特异性，能与APP1-10型的高免兔血清发生阳性反应，与猪瘟、猪肺疫等类似症状疾病呈阴性反应。盐浸抗原具有型特异性，笔者用此法对我国4个省的APP血清型进行了调查，主要为2、3、7型。由于此方法操作简便、耗时少，目前已成为我国主要的检测和分型方法。 3 乳胶凝集试验（Latex Agglutination Test，LAT） Mitui等1981年建立乳胶凝集法检测APP抗体，其特异性和敏感性与试管凝集试验、补体结合试验、琼脂扩散试验相当。不同血清型之间有较小的交叉反应，但异种血清无交叉反应。1995年，Inzanacq对LAT进行改进，以荚膜缺陷株对同型血清进行吸附，除去非荚膜抗体，从而得到纯度较高的荚膜抗体，包被乳胶颗粒，检测APP荚膜多糖。此法具有很高的特异性，与猪放线杆菌、猪巴氏杆菌、副猪嗜血杆菌无交叉反应，只与APP同型的的菌株反应。 4 琼脂扩散试验（Gel Immunodiffusion，GID） Gunnarssonc7]1979年以酚水法提取5个APP血清型的抗原建立APP的琼脂扩散试验表明，酚水抗原具有型特异性，与异种血清型无交叉反应。国内李开玉等阎报道用酚水抗原检测血清，特异性最高，但仍不能区分血清型1和9，血清型3、6和8。不同血清型之间的交叉反应可通过菌体吸收法除去。该法耗时较长，但操作简便，试剂易得，结果判定简单，适宜基层应用。 5 酶联免疫吸附试验（enzyme-linked immunosobent assay, ELISA） 5.1 种特异性ELISA Schaller等c911999年发现并报道了ApxⅣ毒素，任何APP血清型都能在感染猪体内分泌该毒素，但在体外不分泌。目前，国内外已成功实现了ApxⅣ毒素的体外表达。Dreyfus等uo]2004年以ApxⅣ重组蛋白建立了ApxⅣ-ELISA，特异性和敏感性分别达到100010和93.80/0。此外，ApxⅡ也可作为一种很好的诊断抗原，除血清型10外，在生物I型的所有血清型中均可分泌，利用ApxⅡ作为诊断抗原，理论上可以对除10型外的其它生物I型的感染作出诊断。Leiner等[--]和徐晓娟等[-日先后利用克隆表达的Apx Ⅱ作为诊断抗原，建立ELISA诊断方法，与CFT和IHA比较，具有更高的特异性和敏感性。尽管Apx 毒素具有很高的免疫原性，并产生很高的抗体滴度，但也存在缺陷，除ApxⅣ外，Apx I、ApxⅡ、ApxⅢ在其它放线杆菌属的细菌也可分泌，如林氏放线杆菌和猪放线杆菌等吼因此，在利用Apx I、Ⅱ、Ⅲ作抗原进行血清学检测时会出现假阳性结果。 |
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