疫病监测
鸡新城疫血凝抗体监测应注意的问题
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鸡新城疫病是危害养鸡的一种严重传染病，对新城疫的防治要按免疫程序进行免疫。但首免日龄的确定、免疫后机体反应的效果如何，及其间隔多长时间进行第二次免疫，都取决于机体内的抗体水平。抗体可存在动物的血清中，可以通过免疫监测的方法检测出来。但是在免疫监测的实际操作中，监测结果受到诸多因素的影响。就在检测鸡ND抗体效价时应该注意如下问题，综述如下： 1、抗原方面 免疫监测实质上是一个抗原抗体反应的过程。在此，抗原的效价一定得标定正确，每次监测之前一定先准确测定抗原的效价，应该是同时测2～3遍取其平均值，然后根据其准确效价配制所需病毒液（如4单位病毒）。 2、抗体方面 检测抗体水平，需取血清为检测样本。要采样的过程中及盛放样本的试管不能污染，不能含有杂质，不能含有与抗体无关的蛋白质。也不能加有抗凝剂，不能有溶血物，否则血清就不易分离或影响其抗体的效价。分离好的血清应该是淡黄色透明液体。 3、红细胞方面 红细胞的制备非常重要。红细胞应采自没有免疫过的成公鸡，未成熟的公鸡红细胞较脆弱，易溶血，不能用。红细胞经过反复离心洗涤后配成0.75%为最好，实践证明，0.5%和1%的红细胞都不如0.75%的好，这是由于现在普遍使用的微量法测定，在96孔反应板上进行，红细胞量的多少也会影响结果，过多过少时都会影响结果的准确性。 4、操作过程 免疫监测是一种血清学试验，应以科学的角度来对待，应该注意好如下几点： 4．1 加样时，各种成分一定要掌握准确的剂量。移液器是定量的，但受操作者手用力的影响，用力大小不匀时，吸取的量就不均匀，用力正好在标定的刻度上，能吸取均匀等量的样液，这是一个要求技术人员反复操作熟练的过程。注意在取样时每次取样吸头中不得含有气泡，如果有气泡存在会占有体积，取样量又会因此而不准确，而造成检测结果的误差。 4．2在每一次做抗体监测时都应该做回归试验，并且每个反应板都要做一个回归。还必须设有标准阳性对照和标准阴性对照，这样才能反映出每一个反应板中各个待测样品的真实情况。由于配备好的4单位病毒受外界因素影响，时常发生变化，可以根据回归试验的结果来判断样品检测结果的准确性。 4．3抗体免疫监测试验在室内温度下均可以进行，但是温度不同结果出现的时间是不同的，22～28℃条件下最适宜，有条件的可在恒温箱内进行反应。没有恒温箱的在自然条件下反应也可以，但是要掌握好观察结果的时间。 4．3操作时加入抗原和抗体后要在微量振荡器上进行一次振荡（1min），让其作用后再加入红细胞，再进行第二次振荡（1min），两次振荡的目的是使各样品充分混匀，达到充分作用的效果。然后放在22～28℃的温箱内或室温下作用，等候观察结果。 5、观察和记录结果 反应分两个阶段，第一阶段是抗原抗体特异性结合阶段，发生得很快，但不是显肉眼可见现象；第二阶段是肉眼可见阶段，需要电解质参与，并受多种因素的影响。如果在25℃左右反应，15～18min可以观察结果；如果置于15～20℃下则需要18～22min观察结果；如果在15℃以下，则需要25min后观察结果等。观察结果时要边观察边记录，并在2～3min内再重复观察记录一次结果，核对一下第一次的结果。如果两次的结果相同，只是第二次更明显，可以说是检测成功。如果有可疑的样本应间隔2min再观察一次，仍不能准确判定结果的应重复操作一次。 6、监测结果的实际应用 一般鸡新城疫抗体免疫接种临界HI价为1：16～32或40，雏鸡免疫器官7日龄接近发育成熟，鸡体对新城疫疫苗的免疫应答是随龄期的增长而加强。科学推算首免日龄和加强免疫时间的公式是：雏鸡最适首免日龄＝半衰期×（1日龄雏鸡HI抗体效价几何均数的以2为底的对数值-4）＋5。 |