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4 双抗体夹心ELISA
王新平等［7-8］以双抗体夹心ELISA对长春地区293头奶牛和262头黄牛血清进行了检测，结果奶牛和黄牛的阳性率分别为54.9%和43.5%。经敏感性、特异性和重复性试验证实，该方法是一种敏感、特异、快速、操作较简便、适用于基层的检测方法。并在此基础上研制成了诊断试剂盒。Saliki J T等［9］采用病毒分离(VI)和双抗体夹心ELISA（S-ELISA）两种方法对408份牛血清样品进行了检测，已经被VI法判定为阳性的172份血清和被判为阴性的236份血清重新用S-ELISA进行了检测，最后两种方法判定的结果完全一致，敏感性和特异性的吻合率均为100%。
5 单抗夹心ELISA
随着单克隆抗体技术的发展，以特异性单抗做包被抗体的ELISA方法得到广泛的应用。Mignon B等［10］应用单克隆抗体去捕获血样中BVDV，通过对761份已知状况的样品进行检测，结果，其特异性、敏感性都达到了100%，高于经典的病毒分离法（virus isolation，VI）,而且二者的相关性超过90%。钟发刚等［11］采用酶标的BVDV单克隆抗体作为包被抗体，研制出捕获抗原ELISA检测试剂盒，经试验证实，比传统试剂盒相比，该试剂盒敏感性高，特异性强，重复性好（批间的变异系数为7.46%,批内变异系数为6.58%），而且可以直接进行抗原检测。
6 竞争ELISA
Beaudeau F等［12］对从42个奶牛场采集的1 189份血清及奶样用竞争ELISA进行检测，结果检测血清的敏感性和特异性分别为96.9%，97.8%；检测奶样敏感性和特异性为96.9%，97.3%，这一结果表明，竞争ELISA适合大批样检测，并可用于BVDV消灭。Katz等应用同样的方法对147份已知状况的胎牛血清进行试验，同时用血清中和试验（SNT）作对比，经过试验，稀释过的犊牛抗BVDV血清与未稀释的胎牛血清两种样品检测的结果刚好相反。该方法不需要纯度很高的抗原，洗涤时不需去污剂。Kramps J A等［13］建立了针对瘟病毒非结构蛋白NS3的不同高度保守表位的两株单抗WB112和WB103，以这两株单抗作包被抗体，采用竞争ELISA对 1 000份血清进行检测，并用病毒中和试验作对照，结果ELISA的敏感性和特异性分别为98%和99%，该方法能够检测出疫苗接种和病毒感染12 d以后的动物血清中的特异性抗体。因为该优点，丹麦把竞争ELISA作为根除BVDV的一个重要的方法。Vanderheijden N等［14］将BVDV Oslossp80基因插入杆状病毒载体中进行表达，制备出重组抗原，用于竞争ELISA中来检测牛血清中BVDV抗体水平。经试验证实，该方法与病毒中和试验所得到的结果高度相关。
7 M-ELISA
当检测非致细胞病变型BVDV时，可以采用此方法。Saliki J T等［15］以单层细胞ELISA(monolayer-cell enzyme-linked immunosorbent assay,M-ELISA)检测BVDV持续性感染牛的血清样品，并与免疫组化法做比较。结果两种方法敏感性的相关性为85%，特异性的相关性为100%，经过试验比较，M-ELISA更适合整群牛中PI牛的检测。以血清作为诊断样品，使此方法具有采样方便、能以较低的费用快速检测大批样品等优点。
8 结语
鉴于该病对畜牧业严重的危害，有必要加强BVDV的检测。ELISA因其操作简便、敏感性强、重复性好、适合大批量样品的检测等优点，已被应用于各种畜禽疾病的诊断，成为了一种常规的检测方法。当前在国外已有BVDV检测ELISA商业试剂盒，其准确度高、敏感性强、重复性好。国内由于对BVDV的危害性缺乏足够重视，因此在这方面的工作大多处于实验室研究阶段，今后继续致力于提高ELISA方法的重复性、稳定性、特异性及敏感性等，并以此建立起标准化的检测BVDV的ELISA试剂盒仍是广大兽医工作者研究的重点之一。
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