非洲马瘟防控知识问答

63. OIE 推荐的临床病例的确认方法是什么？

OIE 推荐的临床病例确诊方法是实时荧光 RT-PCR 和病毒分离。非洲马瘟可直接用 BHK-21、MS、VERO 等哺乳动物细胞系进行分离，亦可用库蠓、蚊子等昆虫细胞系进行分离。实时荧光 RT-PCR 具有高度敏感性，可应用于感染动物血液及其他组织中非洲马瘟病毒核酸的快速鉴定。

64. 非洲马瘟病毒的血清分型用什么方法？

到目前为止，病毒中和试验一直用于非洲马瘟病毒的血清分型，该方法可利用型特异性抗血清鉴别非洲马瘟分离株。该技术至少需 5 天才可获得结果。常规 RT-PCR 和实时 RT-PCR方法可对组织和血液样品中的非洲马瘟病毒进行快速分型。但由于非洲马瘟病毒基因组会发生变异，尤其是在靶基因VP2 编码区，因此，病毒中和试验试验仍是非洲马瘟分离株血清分型的金标准。

65. 开展非洲马瘟监测可选用什么检测方法？

基于 VP7 抗原的间接 ELISA 和竞争 ELISA 可用于检测非洲马瘟病毒群特异性抗体，特别适用于大规模样品筛查，这两种方法已获得欧盟认可（2002 年）。免疫印迹试验也可用于检测非洲马瘟病毒抗体，适用于小量样品检测。已有商品化竞争 ELISA 试剂盒。

66. 如何采集马匹血样？

1.保定好马匹，使其头部稍前伸并稍偏向对侧。

2.对颈静脉局部进行剪毛、消毒。

3.看清颈静脉后，采血者用左手拇指（或食指与中指）在采血部位稍下方（近心端）压迫静脉血管，使之充盈、怒张。

4.右手持采血针头，沿颈静脉沟与皮肤呈 45º角，迅速刺入皮肤及血管内，如见回血，即证明已刺入；使针头后端靠近皮肤，以减小其间的角度，近似平行地将针头再伸入血管内 1～2 厘米。

5.放开压迫脉管的左手，收集血液。采完后，以干棉球压迫局部并拔出针头，再以 5％碘酊进行局部消毒。

67. 怎样制备血清样品？

将采血管在室温下倾斜放置 2～4 小时（防止暴晒），待血液凝固后 37℃温箱内放置 1 小时 或 4℃冰箱内过夜，待大部分血清析出后经 1500～2000 g 离心 5 分钟，分离血清。

68. 如何采集用于病原检测的样品？

发热动物取抗凝血，死亡动物取 2 克左右脾、肺或淋巴结， 4℃保存或放入 50％甘油-磷酸盐缓冲液中，在 4℃条件下运送和保存。

69. 普通实验室可以做非洲马瘟病原分离吗？

非洲马瘟病毒是一类动物病原微生物，是我国尚未发现的动物病原微生物，从事病原分离培养应当报农业农村部审批，并在生物安全三级实验室中进行。

70. 我国有非洲马瘟参考实验室吗？哪些实验室可以进行确诊？

我国尚没有非洲马瘟参考实验室。非洲马瘟确诊由中国动物卫生与流行病学中心或农业农村部指定实验室进行。

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