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兽医实验室诊断--动物蠕虫检查

时间:2014-07-19    点击: 次    来源:阳光畜牧网    作者:阳光兽医 - 小 + 大

        ③片形吸虫卵的计数法:在羊粪中计数时,称取羊粪10g,置于一个300mL容量的瓶中。加入少量1.6%浓度NaOH溶液,静置过夜。次日,将粪块搅碎,再加入1.6%的NaOH 溶液到300mL刻度处。再摇匀,立即吸取此粪液7.5mL注入到一离心管内,在离心机内以每分钟1000转的速度离心2min,倾去上层液体,换加饱和盐水,再次离心后,再倾去上层液体,再换加饱和盐水,如此反复操作,直到上层液体完全清澈为止。倾去上层液体,将沉渣全部分滴于数张载玻片上,检查全部所制的载玻片,统计其虫卵总数,以总数乘以4,即为每克粪便中的肝片形吸虫虫卵数。在进行牛粪中肝片形吸虫虫卵计数时,操作步骤基本同上,但用粪量改为30g。加入离心管中粪液量为5mL,因此最后计得虫卵总数乘以2,即为每克粪便中虫卵总数。 
        虫卵计数的结果,常可作为诊断寄生虫病的参考。以马为例,当线虫卵数量达到每克粪便中含卵500枚时,为轻感染;800~1000枚时为中感染;1500~2000枚时为重感染。以羔羊为例还应考虑感染线虫的种类,一般每克粪便中含2000~6000虫卵时应认为是重感染;在每克粪便中含虫卵1000枚以上,即认为应给以驱虫。以牛为例,每克粪便中含虫卵300~ 600枚时,即应给以驱虫。在肝片形吸虫,牛每克粪便中的虫卵数达到100~200时,羊达到300~600时即应考虑其致病性。 
        3.幼虫检查法
        有些寄生虫(如网尾科线虫),其虫卵在新排出的粪便中已变为幼虫,类圆属线虫的卵随粪便排出后,在外界温度较高时,经5~12h后,即孵出幼虫。
        (1)漏斗幼虫分离法亦称贝尔曼法。取粪便15~20g,放在漏斗内的金属筛上(可将金属筛布剪成圆片放于漏斗中),漏斗下接一短橡皮管,管下再接一小试管。将粪便放漏斗内铜筛上,不必捣碎,加入40℃温水到淹没粪球为止,静置1~3h。此时大部分幼虫游走于水中,并沉于试管底部。取试管底部沉渣,在显微镜下检查。
        (2)平皿法特别适用于球状的粪便,取粪球3~10个,放于培养皿或表面玻璃上,加少量40℃温水。10~15min后,取出粪球,将留下的液体在低倍镜下检查。
        4.粪便培养 圆线虫目所属线虫种类很多,其虫卵在形态上又很相似,很难区别。为了区别这些线虫的种类,常将含有虫卵的粪便加以培养,待其中虫卵发育成为幼虫时,再检查幼虫,根据幼虫形态上的差异,加以鉴别。最常用的方法是:在培养皿底部加草纸或滤纸一张,而后将欲培养的粪便加水调成硬糊状,塑成半球形,放于皿内的纸上,并使半球 形粪球的顶部略高出平皿边沿,使加盖时与皿盖相接触。将此皿置于25℃温箱中,注意保持皿内湿度(应使底部的垫纸保持潮湿状态)。经7天后,多数虫卵即可发育成第三期幼虫,并集中于皿盖上的水滴中。将幼虫吸出置载玻片上,放于显微镜下检查。
        5.毛蚴孵化法 本法为诊断分体吸虫病特用的方法。为了提高诊断的可靠性,应采用三粪六检(即每头牛采粪3次,每次粪样检查2次)。
        取新鲜牛粪100g,置于500mL容器内,加水调成糊状,通过40~60目铜筛过滤,收集滤液。在有260目锦纶筛兜时,可将以上滤液倒入兜内,加水充分淘洗,直到滤出液变清为止,而后将兜内粪渣供孵化用。在没有锦纶筛兜时,可将以上滤液收集于500~1000mL的量杯中,加水,静置20min,待粪渣和虫卵下沉后,倾去上层液,再换入清水,此后每隔15min换水一次,直到水清澈为止。当水温在15℃以上时,第一次换水后,应改用1.0%的食盐水洗粪,当水温在18℃以上时,全部洗粪和沉淀用水均应改用1.0%的食盐水,以抑制毛蚴过早孵出。 
        以上洗净的含有虫卵的粪渣,即可用于孵化。将粪渣倾入500mL三角烧瓶内,加入温水(不可用盐水)进行孵化。孵化时外界温度以22~26℃为宜,室温在20℃以上时,即无需加温。孵化时应有一定的光线。样品进行孵化后,经1h、3h、5h各观察1次,检查有无毛蚴在瓶内出现。毛蚴为灰白色,折光性强的棱形小虫,多在距水面下方4cm以内的水中作水平的或略斜向的直线运动。观察时应与水虫区别,毛蚴大小较一致,水虫则大小不一,一般略大于毛蚴,显微镜下观察,毛蚴呈前宽后狭的三角形,前端并有一突起,水虫多呈鞋底状。
        (二)肛门周围刮下物检查
        这是诊断马尖尾线虫病的特有方法,采用牛角药匙,蘸取50%甘油水溶液,而后轻刮肛门周围、尾底和会阴部分的表面,将刮下物直接涂布于载玻片上,即可供检查。 

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