猪圆环病毒病及其生物制品学的研究进展

    自该病在我国报道以来，其免疫学及生物制品学方面的研究和探索很快成为一个热点。我国开展的研究主要包括以下几方面。

    杆状病毒载体疫苗的研制：2005年，刘长明等将猪圆环病毒2型的ORF2在昆虫杆状病毒中进行了表达，该重组蛋白具有良好的免疫活性反应。昆虫细胞系表达系统要取得最佳的结果，必须有优质的培养介质和条件.对氧的需求量很大，大规模生产中必须搅拌，但搅拌过程又可能对细胞造成很大的压力。该系统无法进行连续性表达；糖基化方式与哺乳动物细胞存在一定差异，糖侧链甘露糖的成分较高，而复合寡糖缺乏，且糖蛋白的糖链结构多为简单的不分支结构，此外宿主细胞生长慢，培养基昂贵。伪狂犬病毒载体疫苗的研制：琚春梅等对表达了猪圆环病毒2型ORF2蛋白的重组伪狂犬病病毒进行了生物学特性的研究，结果表明该重组病毒具有良好的遗传稳定性，能诱导小鼠产生特异性免疫应答，并对强毒的攻击具有一定的保护作用。

    痘病毒载体疫苗的研制：金宁一等对PCV2核酸疫苗和痘病毒载体表达PCV2 ORF2的亚单位疫苗作了比较，发现痘病毒载体表达系统制备的亚单位疫苗比核酸疫苗抑制PCV2病毒复制的效果要好,在临床试验中能使猪抵抗PCV2的攻击。

    腺病毒载体疫苗的研制：王先炜等构建了含有猪圆环病毒2型Cap蛋白的重组腺病毒，为研制PCV2重组腺病毒基因工程疫苗进行了探索。

    嵌合病毒的研制：刘新文等构建了具有感染性的嵌合猪圆环病毒PCV2-1,该重组病毒有望成为圆环病毒疫苗的候选株。

    核酸疫苗的研制：金宁一等构建了猪圆环病毒2型核酸疫苗，该疫苗能诱导小鼠产生良好的细胞免疫和体液免疫。宋云峰等将PCV2 ORF2基因克隆入真核表达载体pCDNA3.1(+)，将构建的PCORF2作为核酸疫苗免疫小鼠。同时将具有蛋白转导功能的BVP22基因分别克隆到ORF2基因的上游和下游，使二者融合表达，并命名为pCORF2BVP22和CBVP22ORF2。分4组免疫接种BALB/C小鼠，分别肌肉注射pCD2NA311(+)、pCORF2、pCORF2BVP22和pCBVP22ORF2，共免疫2次。同时为在体外验证ORF2和BVP22基因的真核表达，将ORF2和BVP22基因分别克隆入pEGFP2N1载体，构建了pNORF2和pNBVP22，转染Hela细胞后在荧光皿微镜下观察到了ORF2和BVP22在体外的瞬时高效表达。结果显示，通过2次免疫后，各疫苗组均产生了针对ORF2的体液免疫抗体，同时证明BVP22可增强核酸疫苗的免疫效果，其中以BVP22在ORF2上游的效果更好，为防控猪圆环病毒2型感染提供了较为理想的候选疫苗。

    目前，一些国家已经研制出商品化的疫苗用于PMWS的防治，主要包括灭活疫苗、重组疫苗、DNA疫苗及嵌合病毒疫苗等。勃林格殷格翰动物保健(美国)有限公司利用昆虫杆状病毒表达ORF2蛋白，研究成功了PCV2亚单位疫苗，该疫苗的安全性及有效性都得到了试验肯定，并已在包括我国在内的多个国家注册。法国梅里亚公司利用PCV2接种悬浮培养的PK-15细胞繁殖病毒，将病毒抗原浓缩约1/40后，经β-丙酰内酯(BPL)灭活，制成油包水乳剂灭活疫苗，用于后备母猪或经产母猪免疫，仔猪通过吮吸初乳，获得被动保护，可减少PCV2引起的感染，并减少排毒、病理损伤和其他临床症状。该产品主要在欧洲一些国家注册使用。美国富道动物保健品公司利用猪圆环病毒1-2型嵌合体病毒感染PK-15细胞，病毒经浓缩后，经二乙烯亚胺灭活。制成灭活疫苗，该疫苗也在一些国家注册成功。

    我国国内也已有自主研发的猪圆环病毒灭活疫苗(猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株、猪圆环病毒2型灭活疫苗LG株和猪圆环病毒2型灭活疫苗DBN-SX07株)上市。猪圆环病毒2型灭活疫苗LG株由哈尔滨兽医研究所研制，该产品以猪圆环病毒2型遗传标记毒株LG株为毒种，经细胞培养传代，优化了病毒增殖条件，由获得较高效价的病毒培养物制备而成。该产品采用的ISAl5VG佐剂属于水包油剂型，可刺激接种动物产生快速免疫应答反应，抗体效价高、持续时间长。猪圆环病毒2型灭活疫苗SH株是以南京农业大学为主要研发单位研究开发的，以PCV2分离株SH株接种PKl5-Bl克隆细胞制备抗原，浓缩后，经甲醛溶液灭活,与矿物油佐剂混合乳化制备而成。猪圆环病毒2型灭活疫苗DBN-SX07株是由北京大北农集团研究开发的，以PCV2分离株DBN-SX07株接种敏感细胞株PK15A培养，收获细胞培养物，经伊-丙酰内酯灭活后，与矿物油佐剂混合乳化制备而成。上述3种获准生产的疫苗均为常规灭活疫苗。

    目前在研制中或已商品化的疫苗，大多是针对减少或改善仔猪PMWS症状的，商品化疫苗确切的使用效果也已被实验室试验和临床数据所证实。至于对猪皮炎肾病综合征、PCV2繁殖障碍及其他与PCV2有关疾病的预防效果，尚需进一步证实。

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