中药活性成分及药理作用研究新方法

2.4　组合化学技术

天然组合化学库理论认为，中兽药复方是根据中兽医理论和实践以及单味药的功能、主治和性味，通过人工组合形成的具有疗效的相对安全的天然组合化学库^[17]。该方法是以中兽药复方天然组合化学库的多靶作用机理为依据，在中兽医药理论的指导下，采用反映方剂主治病证的药理学指标，通过组分或单体成分的组合筛选，找出其活性最强的有效组分构件。复方成分是由多种结构类型的组合化学库组成的分子库^[18-19]。多数植物药已分离鉴定出100种左右的化学成分，因此，一个由4味～5味中药组成的复方，就可能含有500种左右的化学成分，且在加工炮制过程中可能还会产生新的成分^[20]。通过类似于亲和色谱的方法直接从库中提取有相互作用的化合物，再分别测定各类化合物的结构和生物活性，经过分析和归纳，最终阐明复方作用物质基础。有人采用二元索引库筛选法对川芎、天麻提取物的复方组合化学进行了探索研究，结合血清药理学方法，找出了活性最强的2组构件，即川芎醇提物加天麻醇提物是组合复方抗血小板释放5-羟色胺作用和阻滞血管内皮细胞钙通道作用的基本构件^[21]。中药复方的组合化学研究，体现了复方多组分协同的特点。

2.5　分子生物色谱技术

随着现代色谱、光谱及计算机技术的发展，借助仪器分析手段对中兽药复方的物质基础和作用机理进行研究已被普遍采用。这些技术包括液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、毛细管电泳法(CE)、示差折光检测法(RI)、气相色谱法(MS)、核磁共振法(NMR)等。以这些技术为基础，建立中兽药指纹图谱及“智能统一数据库”，结合中医药理论，有助于阐明复方作用的效应物质基础。同时，随着现代分子生物学的发展，体内神经介质、酶、受体在生命活动中的调节作用逐步被揭示，特别是分子生物学与生物医学、药物化学的紧密结合，产生了分子生物色谱技术。与传统的色谱技术利用分子间的物理作用分离化合物不同，该技术是基于生物大分子的特异性识别和相互作用来分离和测定活性化合物。其操作过程是将生物体内活性物质(如酶、受体、运输蛋白和其他具有重要生理功能的生物大分子)固定于色谱填料中，中药复方提取物经过色谱柱后，经过特异识别、结合和分离，最终被分离鉴定。分子生物色谱中药物在柱上的保留行为直接与活性相关，对生理学和药理学研究具有特别意义。分子生物色谱不仅可研究复方效应物质基础，还有助于阐释药物的分布、排泄、代谢、活性、毒副及体内生物转化。如将肝微粒体固载于色谱担体上，可研究中药成分在生物体内可能发生的生物转化。由于分子生物色谱可用粗提液直接进样，简便快速，重现性好，在中药复方物质基础研究中具有巨大的应用潜力^[18]。

2.6　多靶点筛选与高通量药物筛选

多靶点筛选的方法就是针对中药复方多成分调节作用的多靶点特性，通过配体-受体的药物研究理论，进行药效物质作用靶点分析或有效成分的确定。利用高通量药物筛选是以自动化的方式进行大量的化合物筛选，以获取能够作用于各种生物分子靶点(如细胞表面受体和细胞内信号传导分子等)的具有生物活性的化合物。通过对种类繁多的合成及天然化合物作针对各种药物靶体的筛选，可从中寻找最佳的化合物，进行新药的开发。其特点是规模大、速度快、成本低、周期短。高通量药物筛选建立多指标的中药成分筛选，大规模药物筛选和计算分析处理已经达到每天可筛选100 000个化合物^[20-22]。

2.7　中药血清药理法

中兽药经口给动物灌服一定时间后采集动物血液、分离血清，用此含有药物成分的血清进行体外实验，可深入揭示药物作用机理的优点，又能够防止中药粗制剂本身的理化性质对试验的干扰，反映中药在胃肠道消化吸收、生物转化、产生药理效应的真实过程，并代表了药物在体内产生作用的真正有效成分。丁岗等^[23]首次在建立地黄HPLC 指纹图谱的基础上研究地黄的血清药物化学， 通过比较地黄药材各提取部位、给药与未给药大鼠血清的HPLC指纹图谱，研究地黄的活性成分及其作用机制。结果表明，地黄水溶性部位给药组大鼠血清的HPLC 指纹图谱与其他给药组及空白对照组有明显不同。

2.8　中兽药的质控和安全性评价

近年来，随着药物分析、检测与研究新技术的发展，中兽药标准化有了突破性进展。《中国兽药典》(2005)中有关中药质量控制的记载比较全面，已成为中兽药临床应用的参照标准，2005年版药典收录中药及其有效成分的质量标准水平有着大幅度提高。薄层色谱法(TLC)、高效液相色谱法(HPLC)、气相色谱法(GC)、高效毛细管电泳法(HPCE)等色谱技术，紫外检测法(UV)，红外光谱法(IR)，质谱法(MS)，核磁共振法(NMR)等波谱技术，各种色谱/波谱、指纹图谱及计算机联用技术的发展，这些技术已被广泛应用于中药的质量研究与评价。另外，一些现代科学技术如DNA遗传标记技术、基因芯片技术、扫描电镜、激光共聚焦显微镜等技术用于中药的质量鉴定方面，建立符合中兽药多成分、多靶点协同作用特点、与体内疗效直接相关的质量控制新体系^[24]。

近年来，随着医药学研究新技术的出现和应用，中兽药的安全评价体系正在逐步完善。中兽药安全评价中研究的新领域有高通量筛选与基因芯片，可以快速大量筛选药物的有效成分或毒效成分；已在细胞水平上研究药物的毒性作用，采用细胞毒性试验 MTT法，可以快速高效地检测药物对细胞增殖的影响及毒性反应^[25]。

3　结语

随着化学、生物学及生命科学等相关领域的发展，中药活性成分及药理作用的研究不断引入新的理论、思路、方法和技术。依据传统中兽医药学理论，借鉴现代科学领域的最新技术和方法，加强学科交叉、协调和配合，有可能在中兽药活性成分及药理作用的研究方面取得重大突破，这对阐明与发展中兽医药理论，创制现代新型中兽药，提高中兽药质控水平，实现中兽药现代化均具有重要意义。

参考文献（略）

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