中药活性成分及药理作用研究新方法

1.5　超微粉碎技术

超微粉碎可使药材的细胞壁破碎，能大幅度提高有些成分的释放度和释放量，且粉碎环境温度低，对不耐热和挥发性成分的物品的粉碎尤为适宜。植物源中药的活性成分多为植物的次生代谢产物，贮存于细胞内。当药材颗粒较大时，有效成分要穿过细胞壁才能释放出来，一般粉碎的药材按传统方法提取时，部分有效成分易残留在细胞内而随药渣弃去。采用超微粒粉碎技术可克服上述缺点。超微粉碎技术在中药粉碎中的应用日趋增多，应用该技术，可以将原料药从传统粉碎75 μm以上粉末，即200目以下粉末，细化至中心粒径5 μm～10  μm，使原药材细胞的破壁率超过95%^[9]。

1.6　微波辅助萃取技术

中药在微波场中，分子发生极化，可将在电磁场中吸收的能量转化为热量，而药材中不同成分具有不同的介电常数，接收微波能量的程度不同。利用中药不同成分吸收微波能力的差异，使中药组织内的某些成分被选择性加热，目标成分从药材中分离进入萃取剂，可显著提高萃取效率。微波辅助萃取是里外同时加热，消除了热梯度，从而使萃取质量大大提高，有效保护了中药活性成分。微波辅助萃取可大大节省时间，如同样的原料用常规方法需2次～3次，而在微波场中可1次提净。此外，微波萃取物纯度高，可水提、醇提、油提，适用广泛^[10]。张梦军等用微波辅助萃取法和水提法提取甘草黄酮，用均匀设计法，优化了微波提取甘草黄酮的实验条件，在优化的试验条件下，微波辅助萃取法(24.6 mg/g)明显优于水提法(11.4 mg/g)。

1.7　酶法提取

酶法提取的原理是利用酶反应的高度专一性，将细胞壁的组成成分水解或降解，破坏细胞壁，从而提高有效成分的提取率。马桔云等^[11]进行了采用酶法从穿心莲中提取穿心莲内酯的试验。在提取之前，加入纤维素酶进行酶解，与原工艺比较，穿心莲内酯提取率大大提高，后经薄层层析检测，两种提取工艺得到的成分没有区别，说明酶的加入不影响所提取的成分。陈哲超等^[12]采用复合酶和热水浸提法综合分离纯化香菇中多糖蛋白，与单纯热水提取相比，总氨基酸与必需氨基酸的含量均提高了2倍以上，香菇多糖含量提高了4倍，抗病毒活性的高分子量多糖含量明显提高。酶法提取对试验条件要求较高，为使酶发挥更大作用，需先确定最适温度、底物的浓度、温度、pH、抑制剂和激动剂等^[13]。

2　中兽药活性成分药理作用的研究新方法

由于中兽药有效成分的复杂性和药效作用的多样性，中药药理学研究一直是中兽药研发领域的难点和薄弱环节。随着现代药物分离、纯化、检测技术的发展，中兽药在君、臣、佐、使的理论指导下，将中药提取物中的某类成分与药理学研究结合，可更有效地判断中药提取物化学组成与药效作用的相关性。

2.1　单味药研究法

中兽药存在多种药用部位，一种有效部位中有多种药用成分，可利用各种现代筛选模型和筛选技术，发现2种～3种不同作用的有效部位和每种有效部位中的2种～3种有效成分。在有效部位和有效成分2个层次上以一种药理作用为主要因素，研究部位间或成分间或部位与成分间相互促进或相互抑制，可初步阐明中兽药综合治疗作用的机制。用极性由小到大的4 种有机溶剂依次萃取当归补血汤水煎液， 所得各部位给饥饿性气虚模型小鼠口服， 以T 淋巴细胞百分数为指标， 探讨发挥益气功效的有效部位，结果证明全方益气的药效物质基础主要存在于正丁醇与水层的极性区间，可能主要是黄芪多糖、苷类及当归水溶性物质。

2.2　整方研究法

整方法将复方视为一个整体，探讨复方的组方依据及作用原理，阐释复方组分的配伍规律及治病作用机制。研究中运用植物化学方法对复方的化学成分进行系统分离和鉴定，以获得全方化学信息，结合单味药成分，还可分析整方与单味药的区别，发现提取过程中有无新化合物生成等。如从中药麻醉复方整方中分离获得东莨菪碱^[14]，从白头翁汤汤剂中获得生物碱、香豆素、皂苷、柠檬苦素4类化学成分。相对于单味药来说，整方中含有更加复杂的化学成分，因此整方法的工作难度更大、涉及面更广。建立有效系统的生物活性指导分离分析方法将是今后的研究重点。若将整方法与拆方法结合运用，更有助于复方效应物质基础的全面阐释。

2.3　代谢研究法

复方成分在消化道内，一些经肠内菌群代谢转化后被吸收，另一些则以原型被吸收，吸收后的成分在肝脏解毒后经胆汁排泄，与肠内菌接触可发生结合、裂解等代谢转化后再次被吸收。还有些成分不被胃肠吸收而直接排泄。代谢研究法的思路之一是用整体动物进行代谢研究，即通过给药后对动物血液、尿、胆汁、胃液、肠液、粪便等进行分析、分离，从而探讨复方在体内真正发挥药效的成分和作用机理。思路之二是在体外模拟体内条件进行代谢研究，即通过分析复方在人工胃液、肠液及肠道菌丛中可吸收成分及其转化特征，结合药效学的结果分离中药复方有效成分。如大鼠口服参附汤后，乌头类生物碱卡米查林、塔拉胺、附子灵以原型形式被吸收，而人参皂苷则是经肠内细菌代谢后以代谢产物compound K形式吸收进入体内，且均通过尿液排出体^[16]。

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