育肥猪猪丹毒与猪链球菌混合感染病例的诊治（图）

4.2 主要病毒病检测

经第三方兽医服务公司诊断，非洲猪瘟、猪伪狂犬抗原、猪蓝耳病抗原为阴性，见表1。

4.3 细菌分离培养

取病猪的肺脏、气管分泌物以无菌操作在鲜血琼脂平板上划线，经37℃需氧与厌氧培养24～48 h后，观察结果。挑取平板上灰白色、透明、表面光滑、圆形、针尖大小（直径小于１ mm）单个菌落进行革兰氏染色。革兰氏染色阳性、纤细杆状细菌为可疑菌落，再挑取可疑单个菌落接种于含５%胎牛血清的TSA平板，37℃烛缸进行纯培养。革兰氏染色阳性、链状排列的细菌为可疑菌落，再分别挑取可疑单个菌落接种于鲜血琼脂平板，37℃进行纯培养。

4.4 细菌生化反应

将纯化后的细菌，接种于相应生化管中，放入37℃恒温培养箱中18～24 h，判定结果。判定标准：阳性呈红色（＋），阴性不变色（－），注意观察生化管中是否有气泡产生。

4.5 药敏试验

用微量移液器吸取细菌培养物涂布接种于鲜血琼脂平板上，置于室温干燥5 min后，用无菌镊子将药敏片紧贴在培养基表面，于37℃恒温箱培养24～48 h，使用游标卡尺测量抑菌圈直径。药敏片来源分为标准药敏片：阿莫西林、多粘菌素B、苯唑西林、氨苄西林、红霉素、青霉素G、氧氟沙星、克林霉素、恩诺沙星、环丙沙星、复方新诺明、四环素、头孢曲松、头孢呋辛。自制药敏片：取双圈定性滤纸用打孔机打成6 mm直径的圆形药敏片备用，取3个干净清洁的药敏瓶烘干不留水分备用。将100片备用打好的药敏片置于单个药敏瓶中，121℃高压20 min灭菌，再放入37℃恒温生化培养箱烘干直至干燥。每瓶加入5 mL商品兽药进行浸泡。商品兽药分别为恩诺沙星注射液、头孢喹肟粉针及两种兽药的混合液。分别标记为自制药敏片1、自制药敏片2、自制药敏片3。

5  实验室诊断结果

5.1 细菌的分离培养及形态学特性

经48 h培养后，有两种菌落生成。一种分离菌株在鲜血琼脂平板形成针尖大小、半透明、表面光滑、边缘整齐的小菌落。涂片革兰氏染色镜检见明显的单个、成对、成簇存在的革兰氏阳性纤细杆菌（见图5）。另一种分离菌株在鲜血琼脂平板上形成的小菌落周围呈不透明的草绿色溶血环。涂片革兰氏染色镜检见链状革兰氏阳性球菌（见图6）。

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