正确认识和应用布鲁氏菌虎红平板凝集试验

4.3 SAT 不适合用于对 RBT 阳性结果进行“确证”

我国现行的《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T18648—2018）将 SAT 作为 RBT 阳性结果的确证方法，但有研究表明，用 SAT 检测接种 S19 疫 苗牛血清，其特异性并不高。一些成功实施牛群布病根除计划国家的经验表明，SAT（或含巯基 乙醇的 SAT）并不能很好区分野生布鲁氏菌感染抗体和 S19 疫苗抗体。同时，必须注意到，SAT 只能检测血清中的 IgM 和凝集抗体，而这二类抗体通常在动物感染布鲁氏菌的早期产生，因此SAT 更适于早期感染的检测，而不适合感染后期的检测，特别是不适合对慢性感染动物的检测。但RBT 不存在上述问题。在一项研究中，比较了 几种检测方法，结论是 RBT 和 iELISAs 敏感性高，而 SAT 是一种较差的检测方法。WOAH 的《陆生动物诊断试验与疫苗手册》（2020 年版）中有关SAT 的描述是，在国际贸易中用 SAT 诊断布病，结果通常是不可靠的。在该手册的“牛种、羊种和猪种布鲁氏菌感染的诊断方法”列表中，明确指出SAT 不适用于疑似或临床病例的确证。

5　在实施布病防控计划中正确使用 RBT

根据 RBT 特性，自 1966 年，它作为一种布病筛选试验而被广泛使用。在一个国家、地区或养殖场实施布病预防、控制或净化措施时，RBT 主要用于以下几种情形。

5.1　在采取防控措施前评估动物群体流行率

在实施布病防控措施前，评估当地动物群布病流行率（在个体水平，更重要的是在群体水平上）对于评估布病在当地造成的危害以及决定采取哪种 干预策略至关重要。在资源有限地区（通常指 自由放牧和轮牧饲养模式，但有时也包括中小规模 密集饲养模式），RBT 以其操作简单、价格便宜、结果易判定的特点而成为评估流行率最实用的检测方法。

5.2　在全面免疫的情形下评估疫苗接种效果

在全面免疫（所有动物都进行免疫接种）情形下，评估疫苗接种的有效性是首要目标，而将检测和扑杀布鲁氏菌感染动物作为次要目标。抗体阳转率是评估疫苗接种有效性的重要指标。接种疫苗 2~3 周后，用 RBT 检测接种疫苗（S 型）动物，评估抗体阳转率。长期实践经验表明，接种动物的抗体阳转率达70%~90%（如果经眼结膜途径接种，抗体阳性率会低一些，一般在 60% 以上），证明 本次疫苗接种有效；如果接种动物的抗体阳转率低于50%，表明疫苗接种效果不良，不能提供足够的免疫保护。

5.3　在采取“免疫 + 检测 + 扑杀”防控策略情形下初筛布鲁氏菌感染动物

当采用“免疫 + 检测 + 扑杀”防控策略时，一般只对未成年动物进行免疫，在动物性成熟后（牛一般在接种后 12 个月，羊一般在接种后 6 个月） 用 RBT 进行检测。检测的目的是初筛布鲁氏菌感染动物。在免疫情形下，RBT 的特异性会下降。为排除疫苗抗体对 RBT 结果造成的干扰，需用特异性更高的确证性试验（如 CFT 和 HN 琼脂扩散试验等）或补充性试验（如 iELSA、cELISA、FPA 等），对 RBT 检测为阳性的血清样品进行再次检测，确证动物是否感染野生布鲁氏菌，以减少疫苗抗体阳性动物被“冤杀”。在此情形下，选 择合适的检测时机也非常重要。检测时机通常与接种动物的日龄、剂量、途径、频次及疫苗的菌株等 因素有关，而且需有经验的流行病学专家根据当地布病流行的具体情况，确定合适的检测时机。

5.4　在无疫状态下证明动物群无布病

对于无布鲁氏菌感染的动物群，可将 RBT 作为一种群体水平的筛查方法，在适当时机（一般 1 年 2 次）对全群动物进行检测，证明无布病，即可 确定动物群无布鲁氏菌感染，以维持动物群的无 疫状态。在这种情形下，对于 RBT 检测出的阳性动物，一般需用病原学方法（如细菌分离鉴定、荧 光 PCR 等）在合适的时机（如产后 1 个月内）重新采集样品，进行确证检测（因为此时血清学检测方法的阳性预测值非常低，即阳性结果的可靠性低），以提高检测的特异性。

6　总结及展望

作为一种经典的常规方法，RBT 是常用的布鲁氏菌抗体检测方法之一。RBT 经过抗原酸化处理后，其敏感性和特异性大大提高。在免疫或布病流行率很低的情况下（流行率几乎接近于 0），RBT 检测出的阳性动物需用特异性更好的“确证性”或“补充性”试验进行再次检测，以尽可能减少疫苗抗体对布病检测结果的干扰，或 FPSR 对 可疑病例确诊造成的影响。但在布病流行地区，对于非免疫动物，无需对 RBT 检测出的阳性样品进 行再次确证。应根据不同的临床情形正确选择使 用 RBT，避免被“误用”。应选用经过标准化的RBT 抗原试剂，否则会影响 RBT 性能（敏感性和特异性）和检测结果的正确性。认识和了解 RBT的特性，根据不同临床情形正确解释和应用检测结果，不但可以降低布病检测成本，而且可极大发挥RBT 在布病防控中的作用。

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