动物源性食品中3类抗生素类药物残留检测

摘要：建立了利用固相萃取方法和高效液相色谱法检测猪肌肉中土霉素、甲砜霉素、磺胺甲氧哒嗪的残留的方法。固相萃取技术能快速有效的提取动物源性食品中的抗生素残留。建立的高效液相色谱法在5~1000μg/L范围内线性良好(R＞0.999)，土霉素、甲砜霉素、磺胺甲氧哒嗪的平均回收率分别为78.6%~86.2%,77.8%~100.5%,84.2%~91.3%,相对标准偏差(RSDs)均小于7%。本方法可用于动物源性食品中抗生素类药物残留的测定。

抗生素类药物残留对人体有巨大的危害，会扰乱人体的微生态，导致菌群失调、细菌产生耐药性、产生过敏反应、毒性作用、产生致畸、致癌、致突变的反应等。土霉素属于四环素类抗生素，对多种病原菌有较强的抑制作用，广泛应用在兽药和饲料添加剂方面。土霉素残留对胃肠肝脏有很大的损害，长期低浓度的药物残留还会诱发病菌的耐药性。磺胺甲氧哒嗪是一种含有对氨基苯磺酰胺结构的人工合成抗菌药，常用于畜禽预防和治疗细菌感染性疾病，但如果在养殖环节中超量使用，可直接或间接地通过环境和食物链的传递，产生耐药细菌，危害人体健康。甲砜霉素属于氯霉素类药物，主要通过抑制细菌蛋白质的合成和抑制抗体的生成达到抗菌作用，在畜牧业中用于预防和治疗家禽呼吸道和肠道疾病。根据GB31650-2019国家标准中规定的动物源性食品中兽药的最大残留限量，猪肌肉中土霉素的最高残留限量为200μg/kg，磺胺甲氧哒嗪为100μg/kg,甲砜霉素为50μg/kg。动物源性食品样品提取前一定要进行预处理，对于动物材料要剔除结缔组织和脂肪等非活性部分。固相萃取(SPE)是将样品中分析物从络合物基体中预浓缩，再进行定量分析的最常用的方法。传统固相萃取法的主要缺点之一是吸附剂(C8，C18等)的选择性低，容易受到样品相似特性的干扰。四环素类抗生素残留的检测方法包括理化检测法、微生物法、免疫分析法、化学发光法、分光光度法等。磺胺类药物检测方法有:胶体金免疫层析技术法、酶联免疫吸附法、高效液相色谱法、液相色谱－串联质谱法等检测方法。对于氯霉素类药物残留检测用到的方法主要是高效液相色谱法和液相色谱－质谱/质谱法。这些方法可以在一定程度上满足检测要求，但是存在一些如操作复杂，检测费用昂贵，重复性差，检测限高，有的甚至会出现假阳性等问题。因此开发一种操作简便，准确度高，且能满足广谱性和高灵敏度的方法具有重要意义。本文参考国家标准，并在此基础上进行了改进，使用HLB固相萃取柱提取富集目标物，用乙腈—磷酸二氢钾溶液作为流动相，采用高效液相色谱法检测抗生素类药物。结果表明，该方法操作简便、灵敏度高、检测限低，可以用于猪肌肉中抗生素类药物残留的检测。

1 实验部分

1.1 仪器与设备

超声波清洗仪(昆山市超声仪器公司);TG16型台式离心机(上海卢湘仪);ThermoU3000高效液相色谱仪(美国赛默飞世尔公司);雷磁PHS-25pH计(上海仪电科学仪器公司);RE-52AA旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂);SPE12固相萃取仪、HLB固相萃取柱(30mg/3mL，上海本昂科学仪器公司)。

1.2 试剂和样品

土霉素(OTC)、甲砜霉素(TAP)、磺胺甲氧哒嗪(SMP)标准品(纯度99%，凯玛生化公司);乙腈(色谱纯，湖北弗顿科学技术公司);甲醇、正己烷(色谱纯，西陇科学股份公司)。其它试剂均为分析纯，实验用水均为超纯水。新鲜猪肉样品购自荆门市菜市场。

1.3 实验方法

1.3.1 样品处理

购买的猪肉样去除脂肪和结缔组织，放入绞肉机破碎处理，均质后的肌肉样品，放入冰箱－20℃保存一个月，使用时将其解冻。样品提取:称取5g捣碎后的样品置于50mL锥形瓶中，加入20mL乙腈超声提取15min，将得到的混合物抽滤，收集滤液。向固体残渣中再加入20mL乙腈超声15min后抽滤，合并滤液。滤液旋蒸至10mL，向滤液中加入20mL正己烷除脂，震荡10min，静置1h待分层后弃去上层正己烷相。然后将溶液旋干，再加入10mL甲醇超声溶解抗生素。样品净化富集:分别用5mL甲醇，5mL超纯水活化HLB固相萃取柱，然后将样品处理液通过固相萃取柱，接着用10mL蒸馏水、10mL5%甲醇溶液淋洗固相萃取柱，除去杂质。最后用10mL甲醇洗脱抗生素。将得到的洗脱液旋干后加入流动相超声定容至5mL，最后经0.22μm滤膜过滤后进样。

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