非洲猪瘟的诊断和防治研究进展

用p54蛋白、p30蛋白和CD2v蛋白胞外结构域融合的DNA疫苗不会产生保护作用，除非与泛素融合。这种构建体可保护一部分免疫过3次的猪(12头猪中有3头)免受ASFV E75(104 HAU50)株的致命攻击。沿着这些思路，对表达文库(expression library)采取了类似的方法，60％的猪(n=5)2次免疫接种后在受到104 HAU50 ASFV E75株的攻击时得到了部分或几乎完全的保护。尽管有上述结果，但在使用CD2v蛋白、p30蛋白和p54蛋白进行蛋白融合的DNA-初免(DNA-prime)时并没有产生保护作用。在此项研究中，用包括ASFV质粒DNA(CD2v、p72、p32、±p17)和重组蛋白(p15、p35、p54、±p17)的混合物对猪(n=5)进行了3次免疫接种。接种疫苗的猪仍然感染ASFV Arm07株或发病。与未接种疫苗的对照组猪相比，接种疫苗的猪在受到ASFV强毒株的攻击后，出现临床症状、病毒血症和死亡的时间更早。ASFV引发的病理变化在接种疫苗的猪上也更重。

使用γ干扰素酶联免疫斑点试验(enzyme-linked immunospot assay，ELISPOT)对被ASFV免疫猪淋巴细胞识别的病毒蛋白进行合理筛选，得到了由ASFV基因A151R、B646L(p72)、C129R、CP204L(p30)、CP530R(pp62)、E146L、I73R、I125L、L8L、M448R、MGF110-4L和MGF110-5L组成的基因库。这些抗原在复制缺陷型人5型腺病毒(replication-deficient human adenovirus，rAd5)初始免疫和改良的痘苗病毒安卡拉株(modified vaccinia Ankara，MVA)增强免疫的引导下，在挑战ASFV强毒株OUR T88/1分离株后，导致一部分猪的临床症状减轻，病毒血症严重程度下降。

例如，含有基因B646L(p72)、CP204L(p30)、CP530R(pp62)、E183L(p54)与成熟的p37产物和pp220多聚蛋白的两段成熟p150蛋白(CP2475L基因)相组合的腺病毒载体疫苗，被证明可以诱导猪产生抗体和T细胞反应，包括细胞毒性T淋巴细胞。然而，攻毒感染显示，相对于对照组，一些疫苗(使用9种抗原混合物的佐剂疫苗)有更严重的反应，并且没有产生明显的保护作用。

最近，对35种合理设计的腺病毒载体介导的ASFV抗原在野猪体内的免疫原性和有效性进行了评估(n=9，按不同的时间表处理)。该混合物包含表达上述抗原的腺病毒和其他      抗原，如EP153R、p10、p15、CP80R、I329L、H108R、K196R、CP312R、F334L、NP419L、NP868R、B66L、H339R和R298L，早先的研究证明这些抗原在家猪体内具有免疫原性。其余的抗原(K145R、B385R、F165R、F778R、S273R、MGF100-1 L、A224L、MGF505-6R和B175L)是根据假定的T细胞表位选择的。挑战是按照“排毒者-猪攻毒-暴露感染”模型进行的，在两个排毒者中肌内接种进行10 HAU50。综上所述，在用ASFV Arm07攻毒时没有观察到保护作用。所有的免疫猪都出现了ASF的临床症状和病理变化。

Goatley等最近证明，当由复制缺陷型人5型腺病毒(初次免疫)和改良的痘苗病毒安卡拉株(加强免疫)引导时，由8种ASFV抗原组成的抗原库可以在ASFV基因I型分离株攻毒后保护猪免受致命疾病的影响。该实验是早先研究的后续研究，该研究证明不同的抗原具有免疫原性，但在采用DNA疫苗初次免疫(DNA prime)/牛痘疫苗加强免疫(vaccinia boost)的免疫策略——“prime-boost”免疫方案——时没有保护作用。保护性抗原混合物含有B602L基因、B646L(p72)基因、CP204L(p30)基因、E183L(p54)基因、E199L(富半胱氨酸蛋白)基因、EP153R(凝集素样蛋白)基因、F317L基因和MGF505-5R基因的产物。该制剂根本不是有效的疫苗，因为所有接种猪在临床上都出现了症状，并显示出相当严重的病毒血症，但这种方法在抗原选择和证明DIVA兼容的亚单位疫苗可提供保护方面具有应用前景。遗憾的是，以上研究同样不能推断出保护作用的明确相关因素。

综上所述，针对ASF的病毒载体疫苗是一种可行的方法，然而，抗原的选择是成功的关键，目前仍缺少有说服力的候选疫苗株。

3.4 疫苗的商业化及其实施

目前，头条新闻和推特相继报道了潜在的疫苗候选株，它们都是作为成功的案例被推出的，并暗示疫苗在短期内是有效的。然而，由于缺乏有效数据，存在安全性问题，以及消费者担忧，并非所有(或者说，几乎没有)候选疫苗都适合作为一种高度有效的短期工具来控制法定动物传染病，而且对于迄今为止提出的所有改良的候选疫苗株，由于缺乏能够确保病毒在标准化条件下复制和生产的永久性细胞系，疫苗的生产将受到严重影响。所有报道的新的和有希望的候选疫苗株都依赖于原代细胞进行生产，这导致疫苗的生产既不安全也不可行。

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