浓戊二醛防冻消毒剂的防冻及消杀效果

1.2.4 体外杀灭非洲猪瘟病毒试验　委托中国农业科学院哈尔滨兽医研究所（国家非洲猪瘟专业实验室）开展试验。依据《非洲猪瘟诊断技术》（GB/T 18648—2020），将 12% 的防冻消毒剂与病毒液等体积均匀混合，在 -20~20 ℃的不同温度条件下，每 10 ℃设为一档，分别作用 10、30、60 min，加入中和剂室温作用 10 min；分别以 5%、10%、20% 的体积分数用水稀释防冻消毒剂，然后接种于已长满单层 PAMs 细胞（猪肺泡巨噬细胞）培养板中，每个稀释度重复 4 孔，同时分别设置中和剂对照组、阳性对照组和阴性对照组；放置于 37 ℃5% CO2 温箱中培养，每 24 h 观察细胞状态及病毒复制产生荧光情况，96 h 后统计试验结果。3 种稀释度（体积分数 5%、10%、20%）的防冻消毒剂灭活病毒结果判定标准：以阳性对照组细胞 90%以上出现明显荧光信号，阴性对照组孔内无荧光信号为前提，若试验组无明显荧光信号，证明非洲猪瘟病毒被完全杀灭，若试验组孔内出现明显荧光信号，证明非洲猪瘟病毒未被防冻消毒剂完全灭活。

1.2.5　消毒剂含量检测 依据《中国兽药典》（2020年）质量标准检测。检测样品：添加防冻剂的浓戊二醛消毒液（体积分数 12%）和添加水的浓戊二醛消毒液（体积分数 12%）。检测时间：配制成品前以及配制成品后 24、48 h。检测试剂：三乙醇胺溶液、盐酸羟胺、纯化水、异丙醇、溴酚蓝乙醇、硫酸滴定液。含量检测方法：取本品 1 mL（相当于戊二醛约 0.20 g），精密称定，加入体积分数6.5% 的三乙醇胺溶液 20 mL、盐酸羟胺中性溶液（取盐酸羟胺 17.50 g，加水 75 mL 溶解，用异丙醇稀释至 500 mL，摇匀，加体积分数为 0.04% 的溴酚蓝乙醇溶液 15 mL，用体积分数为 6.5% 的三乙醇胺溶液滴定至溶液显蓝绿色）25 mL，摇匀，放置 1 h；用硫酸滴定液（0.25 mol/L）滴定至溶液显蓝绿色，并将滴定结果用空白试验校正。每 1 mL硫酸滴定液（0.25 mol/L）相当于 25.03 mg 戊二醛。戊二醛有效含量 =（空白滴定体积 - 样品滴定体积）×滴定液 F 值 ×25.03/（样品称样量 × 规格）/1 000×100%；F 值 = 实际浓度 / 名义浓度。

2　试验结果

2.1　防冻效果

不同体积分数的防冻消毒剂在 -10℃、-20 ℃条件下，24 h 内防冻性均较好，没有出现冻结现象（表 1）。

表 1　不同体积分数防冻消毒剂在不同温度下的冻结情况

2.2　抑菌效果

各消毒剂 100 倍稀释后，大肠杆菌及金黄色葡萄球菌培养基的抑菌圈均可达到标准要求（＞15 mm），对金黄色葡萄球菌较为敏感，其中添加防冻剂的消毒液抑菌圈平均大于不加防冻剂的消毒液 1 mm 左右（表 2）。

表2　消毒剂抑菌圈试验结果                 单位 ：mm

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