2021年福建省龙岩市病死鸡群中4种病毒感染情况调查

1.1.3　主要试剂　病毒 DNA/RNA 提取试剂盒、反转录试剂盒，均购自北京全式金生物技术有限公司；DL 2 000 DNA Marker，购自宝日医生物技术（北京）有限公司；PCR 扩增相关酶，购自湖南艾科瑞生物工程有限公司。

1.2 方法

1.2.1　引物设计与合成　根据 GyV3 SDAU-1 株 （GenBank：mg366592.1）VP2 基 因、ChPV GXCH-PV-25 株（GenBank：MG602515.1）NS1 基因设计特异性引物，参考文献  设计 ALV-J 和CIAV 引物，引物序列如表 2 所示。所用引物均由 福州铂尚生物技术有限公司合成。

1.2.2　样品核酸提取及反转录　参照试剂盒说明书，分别提取组织样品的总 RNA/DNA，并将RNA 反转录成 cDNA，-20 ℃保存备用。

1.3 RT-PCR 或 PCR 检测

采用 20.0 µL PCR 反应体系：PCR 扩增酶10.0 µL，cDNA 或 DNA 模版 2.0 µL，上、下游引物各 0.5 µL，无菌去离子水 7.0 µL。混匀后放入PCR 扩增仪中进行扩增。反应条件：95 ℃ 5 min；95 ℃ 30 s，55~56 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，30 个循环；72 ℃ 5 min。待反应结束后取 7.0 µL 反应终产物加入至 1% 琼脂糖凝胶中，经 125 V 电泳 25 min 后 置于紫外凝胶成像系统中观察结果。

2　结果与分析

2.1　总体情况

对 2021 年龙岩市各地采集的 297 份病死鸡组织样品进行检测，结果 4 种病原均有阳性检出（ 图 1~2）， 分 别 检 出 CIAV、GyV3、ChPV、ALV-J 阳性样品 102、85、56、39 份，阳性检出率分别为 34.34%、28.62%、18.86%、13.13%（表3）。从病原分布看，CIAV 分布最广，除漳平市外其余 6 个区县均有检出，各区县检出率介于12.00%~98.00%；其他 3 种病原呈局限性分布，均 只在 4 个区县有检出，各区县检出率也有差异，但 均在 12.00% 以上，其中武平县 GyV3 检出率高达92.00%。

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