口蹄疫灭活疫苗146S抗原含量与Ct值之间的相关性

一、口蹄疫灭活疫苗

灭活疫苗免疫是当前防控口蹄疫最为有效、最为经济的手段，灭活疫苗是我国防控口蹄疫的排头兵，是口蹄疫综合防控措施的核心防疫物资。口蹄疫灭活疫苗是高滴度的强毒增殖之后，经灭活处理而获得。在使用二乙烯亚胺（BEI）灭活口蹄疫病毒的过程中，烷化RNA分子中的鸟嘌呤或腺嘌呤等，引起单链断裂，因此改变了RNA的结构，进而破坏了RNA的功能，同时BEI与酶系统和核蛋白起作用而干扰核酸代谢，最终破坏了口蹄疫病毒核酸，使病毒完全丧失感染力，但不破坏蛋白衣壳，保留了病毒的抗原性。

二、146S抗原

（一）146S抗原定义

146S为完整的口蹄疫病毒粒子在蔗糖密度梯度中的相对沉降系数。口蹄疫病毒无囊膜，呈圆形，二十面体对称，由蛋白衣壳包裹基因组RNA组成。在FMDV感染的BHK21细胞中，存在４种大小不同的病毒粒子：第一种为病毒感染相关抗原（VIA），沉降系数为3S~4.5S；第二种为壳微体，由5个5S原粒组成一个14S五聚体，具有抗原性，但没有感染性，沉降系数为14S；第３种为不含RNA的空衣壳，由12个五聚体构成的一个正二十面体衣壳，沉降系数为75S，具有良好的特异性和免疫原性；第4种为完整的病毒粒子，其沉降系数为146S，具有感染性和免疫原性。

（二）146S抗原特性

146S抗原对酸、碱、热、紫外线敏感，偏酸、偏碱、过热、冻融和曝晒，均可使146S抗原降解。若疫苗不按要求保存，则会引起146S抗原的严重降解，同时随着保存时间的增加，146S抗原也会轻微降解。

三、Ct值

（一）PCR

PCR，聚合酶链式反应，为DNA聚合酶介导的合成DNA链的反应，是对目标DNA片段进行扩增（大量的翻倍复制）的方法。那么，如果原料中只有1个目标DNA片段，经过1次循环获得2个同样的DNA片段，经过5次循环得到25个同样的DNA片段即32个，如果40个循环则得到240个DNA片段。当然如果原始样本里没有目标DNA，040次方仍然是0。

（二）RT-PCR

1、RT-PCR

在PCR技术的基础之上，通过一定的技术设计，可以实现对合成的DNA的数量进行实时定量检测，也就是实时定量PCR技术。实时荧光定量RT-PCR (Realtime Fluorescent Quantitative PCR) 技术是通过荧光染料或荧光标记的特异性探针，对PCR产物进行标记跟踪，实时在线监控反应过程，结合相应的软件可以对产物进行分析，计算待测样品模板的初始浓度。该技术以特异性强、速度快、灵敏度高等优点，在基因表达水平分析、病原体基因的定性和定量检测等方面得到广泛应用，并且已经成为当前病毒核酸快速检测的主要方法。

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