几种布鲁氏菌病检测方法比对结果分析

2.4.3 qPCR 检测　对采集奶样进行 qPCR 检测，结果只有 1 份呈现 BSSP 和 BA 阳性。

2.5 未免疫牛血清检测

未免疫牛共采集血清 4 份（样品 15、21、35、36 号），在琼扩法、iELISA 和 cELISA 检测中，有 2 份样品（样品 15、21 号）分别被 2 种方法检测为阳性。

3　讨论

在本研究中，不同方法表现出了不同特点。试管凝集试验比虎红平板凝集试验显示出更高的特异性，这也正是虎红平板凝集试验作为初筛，试管凝集试验用以确诊的原因。本研究中，试管凝集和虎红平板凝集试验均显示为强阳性的样品（样品1~4 号），其他血清学方法也显示为阳性，且琼扩法显示存在野毒感染。但是试管凝集试验操作繁琐，等待时间长，而且需要符合要求的实验室环境。虎红平板凝集试验虽然操作简便，但是对检测人员的经验有一定要求，实际检测工作中，对同样的结果经常出现不同的判读标准。虽然没有采用细菌分离鉴定的金标准，但是根据多种方法的检测结果，可以确定本牛场存在野毒感染。通常情况下，奶牛的免疫抗体在 6 个月后就无法检出。然而，本场奶牛免疫时间均超过一年，很多血清样品仍可以检出抗体阳性。这可能是由于本场存在野毒感染且排菌的动物，持续刺激其他免疫奶牛保持抗体存在。

为了最大程度且成本可控的降低风险，一种简便可信的鉴别野毒感染方法就显得尤为重要。

琼扩法虽然能够直接指明免疫动物中是否存在野毒感染，但是其检测成本较高，敏感性有限，对检测人员的操作经验也有一定要求，难以在牛场普及。iELISA 和 cELISA 的敏感性过高，疫苗免疫抗体会严重影响检测结果。本研究中，有 7 份血清样品仅在两种 ELISA 方法中显示为阳性（样品 21~27 号），另有 6 份（样品 28~33 号）仅在cELISA 中显示为阳性。ELISA 方法可以敏感地发现疫苗抗体，但在免疫场判断是否存在野毒感染时，几乎不具有参考性。qPCR 有很好的特异性，但是对实验环境、操作、设备都有较高要求，而且样品中的病原含量可能很低，在不分菌培养的情况下，往往很难直接捕捉到病原核酸。在本研究中，仅有1 份奶样在 qPCR 方法检测中显示为阳性。

间接法胶体金试纸条在本次试验中展示出了较好的参考价值，其所有血清检测阳性的样品被至少 3 种其他方法所支持，而且对奶样检测时，也表现出了与血清学方法良好的符合度，在生产现场具有很好的应用价值。这是因为对于产奶期的奶牛无需采血，减少了对动物的刺激，挤奶时可以当场检测，操作简单、结果清晰。

针对免疫过的奶牛，目前没有一种简便有效鉴别野毒感染的方法。但是通过对几种检测方法的比较分析，间接法胶体金试纸条显示出了较好的参考意义和方便的操作性。对于布病免疫奶牛场，可以在不采血的情况下，通过奶样快速筛查出存在布鲁氏菌感染风险的牛，然后及时对其隔离观察，送样品到当地动物疫控部门检测，做好人员防护和无害化处理工作。

首页前一页1234后一页尾页