2020年四川省部分地区腹泻牛群牛冠状病毒感染情况调查

摘要：为了解四川省主要养牛地区腹泻牛群中牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）感染情况，采集眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等6个市州53个场户的牛腹泻粪便样品共387份，采用荧光RT-PCR方法进行BCoV检测。结果显示：53个场点中，检出阳性场点11个，群体阳性检出率为20.8%；387份样品中，检出阳性样品65份，个体阳性检出率为16.8%。从群间分布看，规模场群体阳性检出率（72.7%）与个体阳性检出率（21.4%）均高于散养户（7.1%和3.1%），差异均极显著（P＜0.01）；牦牛个体阳性检出率为28.8%，高于黄牛（14.1%）和奶牛（11.1%），差异均有统计学意义，分别为P＜0.01和P＜0.05。结果表明，BCoV在四川省已形成一定的污染面，是造成牛腹泻的重要病原之一，需要加强对其流行的综合防控。

牛冠状病毒（bovine coronavirus，BCoV）是套式病毒目冠状病毒科冠状病毒属 2a 亚群的一种RNA病毒，同人类冠状病毒、猪凝血脑脊髓炎病毒、马冠状病毒、鼠肝炎病毒等同属于 β-A 群，可引起犊牛腹泻、成年牛冬痢以及呼吸道疾病。新生犊牛感染 BCoV 后发病率和死亡率均较高，成年牛发病率较高，但死亡率低。当 BCoV 与轮状病毒等发生混合感染时，病死率会增加，且病愈后犊牛生长、发育、生产性能，以及奶牛产奶性能等均会受到影响，并可长期带毒且在一定时期内持续排毒，给养牛业造成严重经济损失。1985 年我国首次报道了由 BCoV 引起的犊牛腹泻病例。近年来的国外调查结果显示，牛群 BCoV 感染现象很普遍，呈世界性分布。国内山东、青海、西藏、新疆等省（自治区）的牛群血清学和病原学调查结果也显示 BCoV 阳性率较高。目前有关四川省牛群 BCoV 感染情况的报道主要是藏区牦牛的血清学调查。调查结果显示，藏区牦牛群 BCoV感染现象很普遍。而四川省其他养牛地区、不同品种牛群 BCoV 感染情况，尤其是病原学调查报道较缺乏。本研究对采自四川省 6 个主要养牛市（州）的 387 份腹泻牛粪便样品进行了 BCoV 病原检测，以期了解四川省主要养牛地区的 BCoV 流行情况，为牛冠状病毒病防控策略的制定提供依据。

1　材料与方法

1.1　样品采集

2020 年 3—5 月，从四川省眉山、南充、达州、巴中、雅安、甘孜等 6 个主要养牛市（州），采集有明显腹泻症状的发病牛粪便样品 387 份，其中眉山市 30 份、南充市 30 份、达州市 30 份、巴中市 120 份、雅安市 97 份、甘孜州 80 份。样品共采自 53 个场户，其中规模场 11 个、散户 42 个。样品来源牛群种类涉及黄牛、牦牛和奶牛，其中黄牛 262 份、牦牛 80 份、奶牛 45 份。样品采集后于-80 ℃冷冻保存。

1.2　主要试剂

BCoV 荧光 RT-PCR 检测试剂盒和磁珠法病毒DNA/RNA 提取试剂盒，均购自北京世纪元亨动物防疫技术有限公司。

1.3　检测方法

1.3.1 核酸提取　用棉签取适量的牛腹泻粪便样本放入装有 500 μL PBS 的 1.5 mL EP 管中，涡旋振荡使粪便样本充分混匀；反复冻融 3 次后，8 000 r/min 离心 5 min，取 200 μL 上清液，按照磁珠法病毒 DNA/RNA 提取试剂盒说明书提取总RNA。

1.3.2　荧光 RT-PCR 按 BCoV 荧光 RT-PCR 检测试剂盒说明书进行检测。

2　结果

2.1 基本情况

检测结果（表 1）显示：6 个市（州）53 个场点的 387 份牛腹泻样品中，共有 11 个场点的 65份样品检出 BCoV 核酸阳性，群体阳性检出率为20.8%，个体阳性检出率为 16.8%。6 个市（州）均有 BCoV 阳性样品被检出，其中甘孜州个体阳性检出率最高（28.8%），其次是巴中市（24.2%）、眉山市（16.7%）、达州市（10.0%）、南充市（6.7%），雅安市个体阳性检出率最低（3.1%）。

2.2　场点分布

本次调查涉及 6 个市（州）的 53 个场点，其中散养户 42 个、规模场 11 个。不同场点的检测统计结果（表 2）显示：规模场的群体阳性率为72.7%，散养户群体阳性率为 7.1%，差异极显著（P ＜ 0.01）；规模场个体阳性率为 21.4%，散养户个体阳性率为 3.1%，差异也极显著（P ＜ 0.01）。

2.3　品种分布

不同品种牛检测结果（表 3）显示，各地不同品种牛腹泻粪便样品中，牦牛样品阳性检出率最高，为 28.8%，其次为黄牛，阳性检出率为 14.1%，奶牛最低，阳性检出率为 11.1%。牦牛阳性检出率与黄牛、奶牛差异均有统计学意义，分别为 P ＜0.01 和 P ＜ 0.05，而奶牛与黄牛差异无统计学意义，P ＞ 0.05。

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