动物源性食品中细菌的检测——分枝杆菌属

分枝杆菌属（Mycobacterium）的细菌在自然界中分布广泛，包括结核分枝杆菌、牛分枝杆菌、禽分枝杆菌和副结核分枝杆菌等。其中，结核分枝杆菌与牛分枝杆菌（Mycobacteriumbovis）被归类为结核分枝杆菌复合物（M.tuberculosis complex），是引起人和牛等动物结核病的主要病原菌。结核病是一种慢性消耗性疾病，其病理特点是在多种组织器官形成肉芽肿和干酪样、钙化结节病变。有资料表明，牛结核病中有7%是结核分枝杆菌感染，而结核病人中106%为牛分枝杆菌感染。世界上结核病人中约有15%是通过饮用了结核病牛的乳而患病的，因此乳和乳制品中结核分枝杆菌的检验尤为重要。

1 病原学特征

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌是分枝杆菌属的主要动物致病菌，也是可以引起人的结核病的病原菌。该菌为细长、直或微弯的杆菌，大小为（0.2～0.5）μm×（1.5～4.0）μm，单在、少数成丛。牛分枝杆菌菌体短而粗。与一般革兰氏阳性菌不同，该菌的细胞壁不仅有肽聚糖，还有特殊的糖脂。糖脂的影响致使革兰氏染色不易着色，而抗酸染色为红色。

该菌为专性需氧菌，对营养要求严格，最适pH为6.4～7.0，最适温度为37～37.5℃，生长缓慢，特别是初代培养，一般需10～30d才能看到菌落。菌落粗糙、隆起、不透明、边缘不整齐，呈颗粒、结节或花菜状，乳白色或米黄色。结核分枝杆菌不发酵糖类，可合成烟酸和还原硝酸盐，牛分枝杆菌无此特性。分枝杆菌对外界环境抵抗力很强，在干燥的环境中可存活6～8个月。

2 流行病学特征

患病的人和动物是主要传染源。结核分枝杆菌随鼻液、痰液、粪便和乳汁等排出体外，污染饲料、饮水、空气等周围环境，使其在人畜之间相互传播。人结核病可以传染给牛，成年牛多因与病人、病牛直接接触而感染。分枝杆菌主要通过呼吸道侵入易感机体，消化道或皮肤损伤时也可以侵入易感机体，引起多种组织器官的结核病。人和多种动物都可以感染该病，在家畜中，牛最易感染结核病，特别是奶牛，其次是水牛、黄牛。其中人通过呼吸道感染肺结核为最多，人结核病的存在严重制约着牛结核病的彻底消灭。牛结核病又能传染给人，人们饮用未经消毒或消毒不完全的患病牛的乳就可能被传染，引起人结核病的流行，所以牛结核病的存在严重威胁着人类的健康。而人畜结核病的交叉传播则造成了分枝杆菌的广泛流行。

该病一年四季都可以发生，没有季节性。

3 危害

结核分枝杆菌和牛分枝杆菌可感染人和多种动物导致结核病，是一种慢性消耗性人畜共患病。

人感染分枝杆菌的主要表现为呼吸道疾病的症状，如咳嗽、咳痰等，后逐步伴有胸痛、胸闷、咯血等症状，当体内结核分枝杆菌数量较大时才会出现全身症状，如乏力、低热、面部潮红、厌食、消瘦等，还会出现关节疼痛等。

牛感染分枝杆菌的主要表现为进行性消瘦、咳嗽、慢性乳腺炎、顽固性腹泻、体表淋巴结慢性肿胀等，结核病给畜牧业尤其是乳业造成巨大的经济损失。牛结核病被我国列为牛病中的二类动物疫病。

4 分枝杆菌的检验方法

4.1 涂片检查

在分枝杆菌的微生物检验中，涂片法抗酸染色后镜检是最直接的方法。

用无菌注射器直接吸取鲜乳5～10mL置离心管中，生鲜牛乳样品在混匀器上中混匀后（或者无菌取乳粉样品5g放入灭菌烧杯中，加50mL生理盐水，剧烈振荡混匀），经4000r/min离心40min，弃上清液，加入0.5mL灭菌生理盐水重悬沉淀，涂片，齐尔-尼尔森（Ziehl-Neelsen）染色法抗酸染色后镜检，如发现红色成丛杆菌，可做出初步诊断。其他细菌和细胞呈蓝色。报告方式见下表。

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