2015—2019年广西柳州市活禽市场低致病性禽流感病毒监测

摘要：为了解广西柳州市活禽市场低致病性禽流感病毒的流行及分布情况，2015年6月—2019年5月持续在柳州市8个活禽市场采集鸡鸭喉头/泄殖腔棉拭子样品1 425份（麻花鸡500份、麻鸭925份），通过SPF鸡胚培养，采用HA和HI试验进行鉴定，并对结果进行统计分析。结果显示：共检出阳性样品156份，阳性率为10.95%（156/1 425）；分离出6种亚型，阳性率从高到低依次为H3、H4、H9、H6、H11和H13，其中H13亚型为广西地区首次报道发现，样品来源于麻鸭；从种属分布和混合感染情况来看，鸭群中6种亚型均有感染，但以H3、H4亚型为主，主要表现为混合感染，而鸡群中只有4种亚型，以H9亚型为主。结果表明，柳州市活禽交易市场低致病性禽流感病毒亚型复杂，尤其是麻鸭，且有新亚型出现，病毒变异重组风险加剧，需要坚持活禽市场禽流感病毒长期监测。

禽流感病毒（avian infl uenza virus，AIV）属于 A 型流感病毒，能引发禽类急性、烈性传染病。AIV 具有亚型多态性特点，目前已在家禽和野生鸟类中发现 16 种 HA 和 9 种 NA 抗原亚型。HA 基因和 NA 基因可以随机组合产生不同亚型病毒，多数为低致病性病毒（LPAIV），少量为高致病性病毒（HPAIV）。目前只发现 H5 和 H7 这两种 HA基因亚型病毒属于高致病性。AIV 变异性大，LPAIV 可通过基因重组和基因突变（抗原漂移和抗原转变）等转变为 HPAIV。此外，AIV 可以跨种属屏障，感染人。

活禽市场作为禽类交易的场所，活禽流动性大、交易品种繁多，又普遍缺乏严格的消毒和隔离措施，这给 AIV 传播带来便利，同时活禽市场也是人群和各类禽类集结接触的主要场所，因此加强 LPAIV 长期监测，掌握其流行趋势，对指导市场管理，加强禽流感防控都具有重要意义。为此，2015 年 6 月—2019 年 5 月对柳州市辖区的活禽市场连续进行 LPAIV 监测，以期了解其感染率、亚型分布、混合感染情况，以便为制定禽流感防控措施提供参考。

1　材料与方法

1.1　主要试剂

H1—H4、H6、H8—H16 亚型 AIV 抗体血清和新城疫病毒阳性血清，由广西兽医研究所兽医生物技术重点实验室制备并提供。

1.2　鸡胚与红细胞

9~11 日龄 SPF 鸡胚，购自北京梅里亚维通实验动物有限公司；1% SPF 鸡红细胞，由广西兽医研究所禽病室按照《高致病性禽流感诊断技术》（GB/T 18936—2003）配制。

1.3　样品采集

在柳州市 8 个活禽市场（市区 2 个、县区 6 个）按月轮流采样，每个市场随机选择 5 个摊位 / 商户，每个摊位 / 商户原则采集 3 份麻花鸡、5 份麻鸭棉拭子样品（根据每个摊位实际鸡鸭数稍有调整）。

2015 年 6 月—2019 年 5 月，共在柳州市 8 个活禽市场 40 个摊位 / 商户，采集喉头 / 泄殖腔棉拭子样品 1 425 份，其中鸡源 500 份、鸭源 925 份。采集后放入 2 mL 离心管（含 1 mL 双抗的 PBS，棉拭子头折断放入）中冷藏运输至实验室，-70 ℃保存。

1.4　病毒分离和亚型鉴定 清洗棉拭子，离心，取 0.25 mL 上清液经尿囊腔接种 9~11 日胚龄的 SPF 鸡胚，每个样品接种2 枚胚，37 ℃孵化；收集 24~96 h 死亡或存活的鸡胚尿囊液，测定 HA 效价，再对 HA 阳性样品测定HI 效价，具体方法参照文献。

2　结果与分析

2.1　亚型分布

在采集的 1 425 份喉头 / 泄殖腔棉拭子样品中，检出阳性样品 156 份，总阳性率为 10.95%； 共检出 6 种亚型，各亚型阳性率从高到低依次H3、H4、H9、H6、H11 和 H13，阳性率 介 于 0.07%~4.00%（表 1）。

表1 LPAIV 各亚型阳性分布情况

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