关于非瘟检测的四个知识点

非瘟日趋复杂的今天，实验室作为防非极为重要的一个关键节点，也必须随着病毒的变化有所改变，否则可能会出现检测方法滞后、固化导致检测结果与临床不符合的情况。

6月底，在杭州的兽医诊断大会上，有幸聆听了一次樊福好老师关于非瘟检测的专题讲座，受益良多，现将其中4个重要知识点浓缩提炼，分享给大家。

一、干式采样法

干式采样法，顾名思义就是利用干拭子或者类似器具，不接触液体，直接采样的一种方法。今天给大家讲一个在临床上容易操作且效果很好的采样方法——干式采样法。

我们拿口腔采样举例子：采样时，操作人员拿医用棉签伸到猪的口腔进行刮擦。尽量刮擦到上皮细胞，然后将棉签倒置，也就是棉头朝上，晾干棉签，之后装入干净的自封袋或者离心管中，送到相关实验室，路途远的，可以选择邮寄。

这是一个在临床上容易操作且效果很好的采样方法，不仅仅可以用于口腔采样，在血液、粪便、环境采样中同样适用。

说明2点：

1、晾干以后的棉签可以常温保存3-5天，基本上不影响检测结果；

2、适用于短时间内（2-4小时）没有办法进行检测的样本。

二、浓障现象

经常在实验室泡的人肯定遇上过这两种情况：

1、明明猪临床表现很典型，特别像小飞，但采样检测的时候就是检测不到；

2、好几个样本混样检测是阳性，结果分开了测，有全变成阴性了。

其原因是，在检测强阳性样本时，往往会出现高浓度的核酸对靶标核酸的扩增产生阻碍作用，导致靶标核酸检测不到。

就像是你明确的知道一棵树上有一片叶子是黄的，但是因为其他颜色的叶子太密太多了，导致你找不到那片黄叶了是一样的。

这种现象就成为浓障，处理方法就是在检测可能的强阳性样本（多见于血液、组织样本）时，先进行稀释，而后再进行核酸提取和扩增。

三、“捞”现象

在检测弱阳性样本时，经常会出现第一次检测是阳性，复检了好几次，结果都是阴性的情况；也会有第一次检测是阴性，复检成了阳性，再复检，又成了阴性的。这种现象就称为“捞现象”。

用一个很形象的比喻解释，就像是你平常熬粥的时候用半碗米，但今天只剩一小勺米了，你用就这一小勺的米熬了粥。尽管粥非常稀，但是里面肯定是有米的，你用筷子去捞，却不一定每次都能捞得到。

针对“捞现象”，只要有一次检测到是阳性，就按照阳性处理。当然了，有个前提就是检测的人够专业，使用的试剂质量够硬。

四、50循环，起跳即阳

市面上流通的非瘟检测试剂，基本上都是以40-45个循环为主，个别厂家可能设计的更少，目前没有一家的试剂设计的循环数是超过45个循环的。

放在往常，这个没什么，按照厂家预设好的程序扩增就行；但是非瘟弱毒出现后，很多病毒载量很低的弱阳性样本，在扩增试剂预设的有效循环区间没有办法检测到目标荧光信，所以按照试剂判定标准，就成了阴性。

同时，现有的试剂阴阳性的界定CT值或者CQ值基本上是35、38或者40这3个，即便是检测到了，也因为样本的CT值或者CQ值不在阳性范围内，要被判定成阴性。

这就造成了一个很大的问题，那就是大量的弱阳性样本因此被检测不到，或者检测到了也要判定为阴性，这就为猪场埋下了巨大的隐患。

“50循环，起跳即阳”的理论就是在此基础上提出来的，具体执行方法就是为了提高实验精度，可以不考虑试剂厂家预设的循环数，统一将循环数上调到50个，同时也不考虑试剂厂家预设的判定标准，只要在50个循环数内，目标荧光出现了起跳，也就是出现了扩增曲线和CT或者CQ值，就判定为阳性。