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动物源性食品中细菌的检测——李斯特氏菌

时间:2021-08-05    点击: 次    来源:中国兽医发布    作者:曲志娜,赵思俊等 - 小 + 大

PCR反应条件:95℃预变性5min;95℃变性45s,53℃退火50s,72℃延伸45s,30个循环;72℃后延伸8min。4℃保存。

(4)电泳 用电泳缓冲液(1×TAE)制备1.8%~2.0%的琼脂糖凝胶,取5μLPCR扩增产物,分别和2μL上样缓冲液混合进行点样,用DNA分子量标记物做参照,3~5V/cm恒压电泳,电泳20~40min,电泳检测结果用凝胶成像分析系统记录并保存。

(5)结果判定在阴性对照未出现条带、阳性对照出现预期大小的扩增条带条件下,如待测样品未同时出现511bp和789bp大小的两条扩增带,则判为阴性;如待测样品同时出现511bp和789bp大小的两条扩增带,则判为阳性。

如果阴性对照和(或)阳性对照未出现预期大小的扩增条带,则本次检测结果无效,应重新试验。

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