布鲁氏菌病血清学检测方法优缺点对比

2.3　全乳环状试验（MRT）

与其他的血清学检测方法不同，MRT 主要通过检测牛奶样本中的抗体来实现布病检测，且一般仅用于奶牛的布病检测，不适用于其他品种家畜。如果待检牛奶样本中存在布鲁氏菌抗体，就会与试验用的红色布鲁氏菌抗原形成复合物，这些复合物会形成紫红色的乳脂环，从而实现布病检测。

相比较于其他需要血清的检测方法，MRT 具有一定的优势，无论是单一奶牛的牛奶还是混合的大缸奶，都能实现布病检测，无需采血，不会使奶牛因驱赶、保定、采血等行为产生应激反应，使奶牛产量不受影响，养殖户更容易接受。MRT 的敏感性能够满足大型牛场布病的现场筛查，特异性较强，操作快捷而简便，试剂成本不高，试验结果可靠准确，是一种能够代替SAT的布病检测方法。但是，如果牛奶样本存放时间较长，或试验温度较高导致牛奶样本腐败，检测结果就可能出现假阳性。当牛奶样本中存在的初乳较多或者混合样本量较大时， 也有可能出现一定的假阳性结果。因此 MRT 对牛奶样本有一定的要求，需要新鲜、无初乳以及无乳房腺的牛奶。

2.4　酶联免疫吸附试验（ELISA）

用于布病检测的 ELISA 有两种：间接 ELISA （iELISA）和竞争 ELISA（cELISA）。iELISA 是待检血清样本中的布鲁氏菌抗体与 ELISA 板上固定的布鲁氏菌抗原物质结合，利用酶标抗体检测，然后通过底物显色，最后用酶标仪来读值。

iELISA 灵敏度较高，标记的抗体较少，成本更低，但是试验周期更长。cELISA 步骤较复杂，但可以检测含有布鲁氏菌抗体的不纯净血清，数据再现性更高，但是整体敏感性和特异性稍低。ELISA 检测布病的敏感性较高，用酶标仪判定试验结果，避免了肉眼观察判定结果的误差，但对专业仪器要求较高，检测试剂比较昂贵，增加了检测成本，此外检测过程中对环境温度的要求也较高，因而限制了ELISA 的使用。

2.5　荧光偏振测定法（FPA）

FPA 是近年来使用越来越广泛的布病检测方法之一。该方法利用了溶液中分子越大旋转速度越慢的原理。将 FPA 抗原用荧光分子标记，如果待检血清中有目标抗体，那么抗原和抗体就会结合成更大的分子，结合后的分子旋转速度变慢，用一定角度的偏振光测量旋转时间，此时偏振值如果升高，就说明样品血清呈阳性。FPA 需要专业的荧光偏振仪器，抗原和血清中抗体反应迅速，能够在短时间内检测大量的血清样品，操作比较简单，容易学会，特异性和敏感性与 ELISA 相似，但比ELISA 更加节省时间。虽然我国的 FPA 技术起步较晚，但是目前已经研发出较为成熟的配套试剂盒，这对我国布病防控具有十分重要的意义。

2.6　补体结合试验（CFT）

待检血清样本中如果有布鲁氏菌抗体，就会与抗原结合，形成抗原抗体复合物，形成的复合物会与补体结合，从而降低了补体反应液的浓度，结果显示为阳性。CFT 的特异性和敏感性都高于SAT，但是 CFT 的操作较为繁琐，试验步骤较为复杂，耗时较长，试验要求较高，因此不易普及应用不广泛。

2.7　琼脂扩散试验（NH-GD）

NH-GD 是利用光滑型布鲁氏菌表面的一种天然半抗原来鉴定布病疫苗免疫和野毒感染的方法。布病的检测，不容易区分疫苗因素和野毒感染产生的阳性结果。而 NH-GD 能够解决这一问题，且具有很好的特异性和重复性，但抗原的提取和纯化以及试验方法仍需优化。NH-GD 操作技术简便，所需要的试验仪器简单，特别适合在基层推广使用。

3　展望

目前这几种常用的血清学检测方法，为布病的检测提供了多样化的方式。不同的血清学检测方法具有各自的优点，但在实际应用过程中也存在一定的不足。通过对比以上几种血清学检测方法，发现 RBT、MRT、ELISA、FAP 和 NH-GD 更适合用于布病初筛，而 SAT 和 CFT 更加适用于复核。

目前布病的血清学检测方法中还没有一种完全具备敏感性高、特异性强、操作简便、检测速度快和检测成本低等优点的检测方法，因此在布病检测的实际临床应用中，常需两种或两种以上的方法相互配合使用，通过对不同检测方法的结果进行比较分析，来综合判断样品的检测结果。除了现有的检测方法外，应该探索更多的新的布病检测方法，例如荧光微球法、半抗原鉴别诊断方法等，以丰富布病的血清学检测技术，优化当前检测方法的不足，让布病的血清学检测更加准确、便捷和高效。

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