非瘟变异毒株采样及检测注意事项

自去年12月以来，各地非瘟爆发频繁，这一波疫情来势更为凶猛，而且北方发病严重程度超过南方，其中非瘟变异毒株成为众多养猪人关注的热点。本文提供一些思路供诸位养猪界同仁参考。

1、变异毒株感染组接种28天后对攻毒组和同居组猪只进行检测，资料证实检出率以肺组织和扁桃体中含量最高，全身淋巴结以纵隔淋巴结检测率最高。也就是说扁桃体检测更有优势。

2、唾液中含有丰富的酶类，对核酸有降解作用，因此口腔拭子样本要低温保存、尽快运输、尽快检测。温度低是关键。

3、由于饲料残渣、饮水中消毒剂对检测过程影响很大，猪只采样前需要禁食12h，可以将口腔拭子放入含有DNA酶抑制剂的保护液中送检。

4、非瘟检测时应采集EDTA抗凝的全血，临床症状明显期时，猪只会出现血液凝固不良，采血后造成渗血。

5、鼻拭子、咽拭子的采样操作者需要佩戴乳胶手套后再佩戴一次性PE手套，选用长度大于20cm的长棉签，采鼻腔液时建议两根干燥棉签同时采，棉签深入鼻腔或口腔，轻轻转动，彻底润湿后取出。采集后的棉签放入封口袋中。采集下一头时需更换PE手套。采集后的样本放入冰盒中，低温保存，尽快运输检测。

6、车辆、圈舍、地面等环境样本的采集，可取无菌消毒大块纱布多个在PBS液中浸润，在取样范围内进行大范围擦拭取样，取样范围可设定为0.5mx0.5m，取样结束后将纱布放入封口袋中，尽快进行检测。对车辆拖车地板、底盘、轮胎、驾驶室地板及方向盘用同样方法采样。

7、生活区及生产区按功能进行分区采样。收集环境样本时要避免消毒剂的干扰。

8、非瘟检测中ELISA抗体技术不是用于评价免疫效果，而是用于检测是否有基因缺失毒感染，可用于进苗、引种、清群和留种。因此今后实验室开展ELISA检测将成为非瘟PCR检测的一个重要补充。

9、当前非瘟检测环节仍然是人、车、饲料、水源、物资、粉尘（风机的扇叶）、四害（鼠蚊蝇等）、路面及栏舍、排泄物等多方面，总体原则：多点收集，高风险区域加倍采样，合样检测。

10、日常监测重点监测对象为人、车、物、料、水及疑似猪只。人员重点针对返场人员和司机，使用拭子或纱布，对手掌、指甲、指缝、头发、鞋底、手机、电脑进行采样，每个人合样检测；车辆重点针对各类拉猪车、饲料车、私家车，对底盘、轮胎、车厢底、车厢壁、方向盘、中控台、脚踏垫及蓬布进行采样，每辆车合两个样进行检测。物资主要针对疫苗、药品，使用纱布对外包进行采样，抽样比例10%。饲料和饮水每批或每周检测，饲料浸水后进行富集，做到一样一检。疑似病猪采咽拭子和唾液进行检测，一猪一检，检测核酸和抗体，检出阳性后立刻全群普检或抽样检测。

11、非瘟野毒精准剔除时检测程序。挑选出疑似病例（静默）  立刻确认（静默）第二次确认后 精准剔除（2-4天内作消杀处理）一次性整体采样检测（注意区域划分，重点区域增加采样点，做到以猪为中心，合样检测）如有阳性，进入下一个循环，直至检测阴性。生产稳定14天后，全群采血，进行非瘟抗体检测，剔除阳性猪只。

12、截止目前非瘟变异毒株检测并没有完善的程序，因为变异毒株潜伏期长，难于发现，往往通过临床症状发现时已经传播开，但可多做现场排查与验证，核酸检测多部位取样（咽拭子、淋巴结），多靶基因检测（P72\MGF\CD2v)，血液检测抗体（取样时避免交叉污染是关键），适当提高检测频率。有条件的实验室可以开展P72\MGF\CD2v三重检测。

13、建议每日异常猪采样维持原来口腔液不变，同时对风险猪群进行胎衣液拭子、咽拭子采样，对死亡可疑猪可进行肺脏穿刺采样，采样时注意防止交叉感染，采样人员要反复培训直至熟练。对场内采样检测出非瘟变异株的人员即时予以奖励。