山东省生猪屠宰企业非瘟病毒核酸检测能力比对

表 2　不同类型生猪屠宰企业非洲猪瘟检测能力比对结果

2.3　检测结果错误的屠宰企业情况

出现结果错误的 89 个屠宰企业中，有 9 个（10.11%）出现假阳性，74 个（83.15%）出现假阴性，6 个（6.74%）既有假阳性又有假阴性（表3）。

 表3　错误屠宰企业情况

3　分析与讨论

3.1　比对总体情况

参加非洲猪瘟病毒核酸检测能力比对的屠宰企业有 319 家，除了 5 家没有按照规定反馈结果外，其余 314 家均及时反馈了检测结果。其中 225 家为合格，占 71.66%，尚有 89 家屠宰企业检测结果出现错误。针对这种情况，山东省畜牧兽医局及各市县畜牧兽医主管部门已经责令 89 家检测结果不合格的和 5 家未反馈结果的屠宰企业进行停产整顿，并展开现场调查和督导，限定时间内达不到检测要求的取缔其生猪屠宰资格。

3.2　不同类型屠宰企业情况

从结果看，A 类企业检测结果好于 B 类企业，这也与辽宁省的情况一致 [4]。究其原因：A 类屠宰企业屠宰量大，屠宰流程更规范，对非洲猪瘟检测重视程度较 B 类企业高；其产品在全国流通，一旦出现问题将会影响其在全国的销售，因此更加重视产品质量。B 类企业屠宰量小，产品仅在省内流通，部分小型屠宰企业产品仅在市县范围内流通，囿于成本考虑，对非洲猪瘟检测设施设备和人员的投入仅能满足最低要求；而且由于生猪出栏数量降低和生猪价格上涨，一些 B 类屠宰企业难以生存，也很难增加非洲猪瘟检测投入。

3.3　出现假阴性原因

检测结果出现错误的企业中，存在假阴性结果的企业有 74 个，占出现错误结果屠宰企业的83.15%。假阴性即为将真实结果为阳性的样品检测为阴性。经调查分析有以下几种原因：一是屠宰企业自身不重视非洲猪瘟检测，没有投入足够的资金、人员，实验室设施设备不完善；二是从事检测的人员不具备检测能力，没有完全掌握仪器设备的基本操作，试验操作不规范，对于检测结果也缺乏应有的专业知识和经验，不会判定阴、阳性结果；三是实验室设施设备不达标，缺乏检测必备的仪器设备，多采用免核酸提取的方法进行检测，采用的荧光定量 PCR 仪多为国产仪器，灵敏度不够；四是试剂运输和保存不规范，荧光定量 PCR 试剂应在低温环境下运输，在 -15 ℃以下冷冻保存，而某些屠宰企业未按照试剂所需温度、条件运输和保存，造成试剂敏感性下降；五是实验室布局不合理，没有独立封闭区域，部分屠宰企业从生活区随意选取房间开展检测，与检测无关的人员自由出入，导致检测环境不够洁净；六是检测采用的耗材质量不过关，试验所用的 eppendorf 管、Tip 枪头等洁净度不够，造成核酸降解，选用的 PCR 管透明度不够，无法吸收 PCR 扩增产生的光学信号。

3.4　出现假阳性原因

检测结果出现错误的企业中，存在假阳性结果的企业有 9 个，占出现错误结果屠宰企业的10.11%。假阳性即为将真实结果为阴性的样品检测为阳性。经调查分析有以下几种原因：一是实验室布局不合理，配液区、样品处理区、核酸提取区和扩增检测区之间没有物理隔断，没有单向顺序，仪器耗材没有单向流动，扩增过程中产生的核酸累积造成污染；二是实验室硬件不达标，缺少样品处理、核酸提取等需要的生物安全柜，所有操作都在开放环境中进行，造成了环境污染；三是操作不规范，操作过程中阳性对照没有离心直接开盖，产生气溶胶造成污染，加样过程中移液器使用不当造成污染等；四是不消毒或者消毒不彻底，试验结束后，未对实验台面、仪器设备进行清洁消毒，或者消毒不规范，从下游区域向上游区域消毒，且采用同样的抹布擦拭，导致扩增产生的核酸通过抹布带到上游区域，对下一次检测造成污染。

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